【摘 要】
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该研究分三部分,第一部分采用基因工程的方法,制备研究所需的异种重组VEGF蛋白质,主要研究内容包括构建原核表达的重组质粒pET-XV,pET-MV,然后转化大肠杆菌BL21（DE3）,经0.4mmol
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该研究分三部分,第一部分采用基因工程的方法,制备研究所需的异种重组VEGF蛋白质,主要研究内容包括构建原核表达的重组质粒pET-XV,pET-MV,然后转化大肠杆菌BL21（DE3）,经0.4mmol/L IPTG诱导3小时 ,以包涵体形式表达了重组融合p-XV和p-MV.用变性剂8M尿素溶解包涵体,经Ni-NTA金融螯合层析方法进行前后两次分离纯化,复性,并用肠激酶特异性酶切.将融合蛋白N端融合的多肽标记切割去除,获得纯度99﹪以上的重组非洲爪蟾VEGF（简称XV）和小鼠VEGF164（简称MV）.重组蛋白质XV,MV经SDS-PAGE,Western Blot鉴定确为所需目的基因产物.第二部分采用动物实验方法研究异种VEGF重组蛋白质疫苗抗小鼠肿瘤的作用.主要研究内容包括经皮下注射接种培养的肿瘤细胞,建立小鼠纤维肉瘤（MethA）,骨髓瘤（NSI）和淋巴瘤（EL4）三种肿瘤模型,采用保护性和治疗性两种研究方案,给予小鼠免疫异种XV疫苗10μg/次,皮下注射,1次/周,共4周,对照组分别予MV疫苗,佐剂和生理盐水.第三部分研究了异种XV蛋白疫苗与常规化疗药表阿霉素联合治疗小鼠骨髓瘤和淋巴瘤的作用.结果表明联合治疗有协同增强的抑制肿瘤作用,该组小鼠肿瘤生长受到明显抑制.骨髓瘤和淋巴瘤均各有2/10只小鼠肿瘤完全消退,观察至68天,小鼠仍没有肿瘤复发的表现,小鼠生存率达到90-100﹪.明显高于其他三组,异种VEGF蛋白疫苗单独使用也有效,但明显低于联合组.而表阿霉素初始有效,2周后肿瘤很快复发,通过研究还发现联合组肿瘤组织中微血管密度最低而凋亡的肿瘤细胞最多.
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