【摘 要】
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实验目的:细胞周期阻滞即能防止机体的癌变同时也是机体老化的基础,苹果酸酶（ME）是调控细胞代谢及细胞周期的重要限速酶。HPV的持续感染、尤其是高危型HPV,是宫颈癌发生的驱动因素。无论是在宫颈癌前病变、亦或是宫颈癌组织中,HPV16都是最常见、最危险的类型。其中E6、E7是引起宿主细胞永生化转变的主要因素,尤其是E6在癌变的过程中危害更大。现有研究发现,HPV E6可对多种细胞因子产生影响,并通过
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实验目的:细胞周期阻滞即能防止机体的癌变同时也是机体老化的基础,苹果酸酶（ME）是调控细胞代谢及细胞周期的重要限速酶。HPV的持续感染、尤其是高危型HPV,是宫颈癌发生的驱动因素。无论是在宫颈癌前病变、亦或是宫颈癌组织中,HPV16都是最常见、最危险的类型。其中E6、E7是引起宿主细胞永生化转变的主要因素,尤其是E6在癌变的过程中危害更大。现有研究发现,HPV E6可对多种细胞因子产生影响,并通过促进细胞周期进程、细胞凋亡抑制、细胞免疫逃逸和DNA损伤等,最终导致细胞异常增殖、恶变成癌。在此我们针对HPV16 E6是否与ME之间潜在相互作用关系进行研究,并探讨其可能存在的生物学意义。实验方法:我们应用免疫组化方法检测宫颈癌及宫旁正常组织中苹果酸酶2（ME2）的表达,用sh RNA敲减宫颈癌细胞系Ca Ski的HPV E6基因的表达,应用荧光定量PCR技术及Western Blot方法检测HPV E6对宫颈癌细胞系中的ME2的表达及含量的影响,以及测定其对ME2的功能的影响。通过慢病毒介导si RNA,干扰敲减宫颈癌细胞Ca Ski及C33A细胞系中ME2的表达,进行流式细胞周期分析对细胞周期的影响;通过集落形成分析及裸鼠成瘤实验,分析ME2是否对宫颈癌细胞成瘤能力产生干扰。实验结果:宫颈癌组织中的ME2的含量明显增高,在Ca Ski宫颈癌细胞系中,HPV16 E6与ME2的表达正相关;通过降低宫颈癌细胞ME2的表达,可以对细胞周期进行阻滞,进而抑制细胞的增殖;同时,在敲低ME2表达后,宫颈癌细胞的集落形成减少,裸鼠移植瘤的体积明显减少,尤其在HPV阳性的细胞中。结论:HPV E6通过提高ME2的表达促细胞周期阻滞;降低ME2的表达联合HPV E6靶向治疗可成为有意义的尝试。
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