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背景杜氏肌营养不良（Duchenne muscular dystrophy,DMD）是常见致死性X连锁隐性遗传病。临床上DMD尚无有效治疗手段,主要是通过物理治疗、糖皮质激素治疗、矫形治疗等,但都不能延长患者寿命。DMD基因治疗是目前治疗DMD最有希望的手段之一。DMD基因治疗依赖于高效的病毒载体系统,其中腺相关病毒（adeno-associated virus,AAV）、腺病毒（adenovirus,AdV）、慢病毒（lentivirus,LV）等在DMD的基因治疗研究中广泛应用。然而,目前国内的病毒包装技术不成熟,病毒滴度不能达到实验要求,同时包装成本高,价格昂贵。因此,建立高效且经济的病毒包装平台能更好的促进DMD基因治疗研究在临床中的应用。目前DMD的基因治疗研究多采用患者来源的诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells,iPSCs）作为细胞实验模型。然而iPSCs获取效率低,无法避免转染病毒带来的潜在风险。近年来,研究发现羊水来源的间充质干细胞（mesenchymal stem cells derived from amniotic fluid,AFMSC）是羊水干细胞（amniotic fluid-derived stem cells,AFSCs）的一种,其来自产前诊断标本,避免了伦理限制,没有致瘤性,为DMD基因治疗的研究提供新的干细胞来源。因此,本研究在体外建立AAV6,AdV5和LV病毒的包装体系。同时收集1例DMD患胎来源的羊水,从羊水中分离出AFMSC并完成鉴定。将包装好的AAV6,AdV5和LV病毒感染AFMSC,观察三种病毒感染AFMSC的效率,以期建立高效且经济的病毒包装平台,为后续DMD发病机制和基因治疗提供实验依据。目的1.建立AAV6,AdV5和LV病毒的包装体系。2.完成DMD患胎来源的AFMSC的分离与鉴定3.观察三种病毒感染AFMSC的效率。方法1.体外进行AdV5、AAV6和LV病毒的包装,并利用实时荧光定量核酸扩增检测系统（Real-time Quantitative PCR Detecting System,qPCR）完成病毒滴度的测定。2.收集1例DMD基因第10-15外显子发生缺失的DMD患胎来源的人羊水样本,利用直接贴壁法分离出AFMSC,通过细胞形态、染色体核型分析和流式细胞术（CD34、CD45、CD73、CD105）对AFMSC进行鉴定。3.将三种病毒感染AFMSC,比较感染的效率,评估包装后病毒的感染能力。结果1.成功完成三种病毒的体外包装。在三种病毒中,AAV6病毒、AdV5病毒和LV病毒的滴度分别为1.890×1013vg/mL、1.280×108 vg/mL和1.252×1011vg/mL。2.从DMD患胎来源的羊水样本中成功分离出AFMSC。AFMSC呈梭形或长梭形,单层生长,旋涡样排列。染色体核型分析表明AFMSC为正常核型。流式细胞术检测表明AFMSC表面标志物CD34和CD45为阴性,CD73和CD105为阳性。3.三种病毒均成功感染AFMSC。在感染效率上,AdV5病毒的感染效率最高,LV病毒其次,AAV6病毒感染效率最低。结论本实验在体外完成AdV5、AAV6和LV病毒的包装。同时也从DMD患胎来源的羊水样本中成功分离出AFMSC并完成鉴定。体外包装的三种病毒均能成功感染AFMSC,其中AdV5病毒的感染效率最高,LV病毒其次,AAV6病毒感染效率最低。