论文部分内容阅读
目的：1)探讨不同剂量铜绿假单胞菌感染后的SD大鼠表现为重症肺炎模型；2)观察TH17/Trge细胞在铜绿假单胞菌感染的SD大鼠重症肺部炎症中的变化包括肺泡冲洗液和外周血液两个方面；3)探讨两种细胞在铜绿假单胞菌感染后宿主免疫机制中发挥的作用。方法：1)铜绿假单胞菌由桂林医学院附属医院检验科提供,划线接种于血平板上,在37℃的CO2孵箱内培养,为确保铜绿假单胞菌的活性每24小时转种一次。使用前2小时采用分光密度仪比色法和麦氏管目测法,用生理盐水配成0.5×10^10CFU/ml、1.2×10^10CFU/ml、2.0×10^10CFU/ml三种浓度的混悬液。2)8-10周龄的SD大鼠40只,体重200g±20g/只,随机分为对照组10只和实验组30只,实验组分为三组,低剂量、中剂量组合高剂量组(每组10只),腹腔注射10%水合氯醛4ml/kg麻醉后对照组气管插管推注0.2ml的生理盐水,实验组气管内分别给予浓度为0.5×10^10CFU/ml、1.2×10^10CFU/ml、2.0×10^10CFU/ml的混悬液0.2ml,72小时后处死大鼠留肺泡灌沈液和外周血及肺组织,HE染色观察PA感染后肺组织病理变化。3)8-10周龄的SD大鼠80只,体重200g±20g/只,随机分为实验组和对照组各40只,每小组再随机分为五小组各8只。实验组气管插管推注0.2ml浓度为1.2×10^10CFU/mL的混悬液,,对照组气管插管后推注0.2ml生理盐水。在处理后12h、24h、3d、5d、7d分别腹主动咏取血并处死大鼠,并留取肺泡灌洗液。BALF检测炎症细胞的变化；流式细胞术检测大鼠外周血Th17与Trge细胞水平。结果：1)肺部感染临床症状及病理学表现：在PA菌接种的实验组中除低剂量组有2只未有肺炎的临床表现外其有肺炎的临床表现但其程度不同。中剂量组有1只,高剂量组有6只口鼻周围呈现有血迹,且高剂量组有3只在72小时内死亡。对照组无一例有肺炎临床表现,且无死亡。2)接种PA菌的3组大鼠光镜下呈小叶性肺炎,中下肺叶可见融合性出血性病灶且程度有显著意义的差异。外周血与肺泡灌洗液的细菌培养显示阳性率差异均有显著性,中剂量组和高剂量组明显高于低剂量组和对照组且中肺叶研磨每克肺组织的含菌量均大于10^5CFU。2)重症肺炎大鼠模型PA菌感染后12h中性粒细胞明显升高,且在第3天达到峰值(28.09±0.68)*10^6个；Th17细胞在感染的早期迅速升高(2.0±0.14)%,表达趋势与ANC的表达呈相关性,Treg细胞在感染的早期表达下降(3.21±0.10)%,然后随着感染的进展逐渐增加。Th17细胞与Treg细胞在外周血的变化与肺泡灌洗液的变化相一致,而且任何时间段与对照组的表达均存在显著意义的差异(P<0.05),实验组每个时间段两两比较也存在有统计学意义的差异(P<0.01)。结论：1)本实验造模感染部位明确且病变典型,具有良好的稳定性和重复性；2)在PA感染的重症肺炎大鼠模型中Th17细胞参与了重症肺炎发生、发展的过程,并且具有促炎作用；Treg细胞则在肺炎的发生、发展过程中起到抗炎作用,在感染的后期两者渐达到动态平衡。关于给药时期是早期或超早期,以及用药后是否能阻止或逆转两种细胞在重症肺炎的表达减轻对肺脏实质性的损伤还有待进一步实验证实。