【摘 要】
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随着抗菌药物在畜禽养殖中的广泛、不合理使用,细菌耐药性日趋严重与复杂。不仅给畜禽养殖业带来造成巨大损失,加大了疾病防控难度,更威胁到人类生命安全及全球公共卫生。研究显示,通过获取耐药质粒是细菌产生耐药性的普遍机制,由质粒介导产生的耐药性能随耐药质粒的消除而逆转。本研究以从鹌鹑病料中分离得到的1株大肠杆菌作为靶细菌,通过组建的中药复方对其进行耐药质粒的消除,观察结果分析消除前后其耐药性的变化。研究的
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随着抗菌药物在畜禽养殖中的广泛、不合理使用,细菌耐药性日趋严重与复杂。不仅给畜禽养殖业带来造成巨大损失,加大了疾病防控难度,更威胁到人类生命安全及全球公共卫生。研究显示,通过获取耐药质粒是细菌产生耐药性的普遍机制,由质粒介导产生的耐药性能随耐药质粒的消除而逆转。本研究以从鹌鹑病料中分离得到的1株大肠杆菌作为靶细菌,通过组建的中药复方对其进行耐药质粒的消除,观察结果分析消除前后其耐药性的变化。研究的主要内容与结果如下:从来自四川、重庆多个鹌鹑养殖场具有大肠杆菌病临床症状的患病/死亡鹌鹑中分离得到疑似菌株,通过对疑似菌株进行麦康凯平板筛选、革兰染色镜检、16S rRNA扩增鉴定,共得到44株鹌鹑源大肠杆菌。筛选出10株大肠杆菌;对10株进行K-B法药敏试验,选取耐药谱为12且同时对四环素（TET）和氨苄西林（AMP）耐药的菌株D17作为后续耐药消除试验靶细菌。通过煎煮法提取16种单味中药有效成分,用肉汤二倍稀释法测定16种中药对D17的体外抑菌效果,筛选出抑菌效果较好的黄连、黄芩、连翘和地黄,通过两两联合抑菌试验选择联合抑菌指数（FICI）≤1的黄连、黄芩和连翘作为复方中药组分,测定其MIC结果为31.25mg/mL。使用影印培养法研究复方中药对大肠杆菌体外耐药质粒消除作用,试验分为中药sub-MIC组、SDS组和空白对照组,复方中药组共筛选出5株消除子。通过K-B法测定5株中药组消除子耐药表型,选出其中变化最多的一株XD1检测质粒电泳图谱、TET+AMP耐药基因的变化,并用XD1对鹌鹑进行攻毒,结合TET+AMP治疗鹌鹑,结果显示,耐药消除作用后一条1 600 bp左右的质粒条带消失,并且耐药基因也随之消失,证明了耐药基因会随耐药质粒的消除而消失;TET+AMP对消除子攻毒鹌鹑的治愈率为100%,结合药敏试验结果,证明了耐药表型会随耐药性消除而消失。
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