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牛传染性鼻气管炎(infectious bovine rhinotracheitis,IBR)是由I型牛疱疹病毒(bobine herpesivirus-1,BHV-1)引起牛的一种以上呼吸道炎症为主的急性、热性、接触性传染病,给全球养牛业造成了巨大的经济损失,被国际兽医局(OIE)列为B类疾病,属我国进境动物和国际动物贸易重点检疫的对象。糖蛋白gD是IBRV的主要结构蛋白和免疫保护性抗原之一,在致病和免疫机制中发挥着重要作用。糖蛋白gC具有多种重要生物学功能,还能够诱导细胞介导的免疫应答。本研究利用PCR技术扩增出IBRV Bartha Nu/67株gC和gD基因,并进行了分子克隆,成功实现了gC和gD基因在大肠杆菌中的表达;同时构建了gC和gD真核表达载体Bacmid,为今后的转染昆虫细胞奠定了基础。1.参照GenBank发表的IBRV Bartha Nu/67株基因序列,设计合成两对引物,对Bartha Nu/67株IBRV gC和gD基因进行了PCR扩增、克隆和测序。序列分析结果表明,本实验已成功地获得了IBRV Bartha Nu/67株gC和gD基因序列,分别为1311bp和1251bp,与Genbank已发表的序列进行比对分析结果显示,gD基因序列只有一个核苷酸碱基变异,其同源性为99.82%,编码的氨基酸的同源性为100%,即该碱基的突变并未引起编码氨基酸的变化,gC基因序列同源性为100%,编码的氨基酸的同源性为100%。由此表明IBRV基因的高度保守性。根据对IBRV gC和gD基因分析,设计四对带有酶切位点的引物,从克隆的pGEM T-gC和pGEM T-gD重组质粒分段扩增出原核表达片段,然后克隆到表达载体pET-32a和pGEX-4T-2中,经EcoRI和BamHI酶切鉴定,得到阳性重组表达质粒gC4THB和gCpETHB以及gD4TQ、gD4TQB、gD4THB和gDpETQ、gDpETQB、gDpETHB。2.将构建的分段重组质粒分别转化到表达宿主菌BL21(DE3)和BL21中,经终浓度为2mmol/L的IPTG诱导,其中gC4THB和gCpETHB以及gD4TQ、gD4TQB、gD4THB和gDpETQ高效表达了gC和gD分段基因编码的结构蛋白,并且gDpETQ、gD4TQ和gD4THB是可溶性蛋白,而gC4THB、gCpETHB和gD4TQB以包涵体形式存在。Western-Blot检测表明,表达的重组蛋白能够被IBRV阳性血清所识别,具有良好的抗原性。