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众所周知,恶性肿瘤是一种让人闻风丧胆的疾病,其死亡率居高不下。迄今为止,治疗肿瘤的方法,如手术切除、化疗和放疗通常效果不佳,且预后差,因此发现新的肿瘤治疗药物迫在眉睫。C-Myc作为一个癌基因,在各种动物甚至人类肿瘤中被激活。它可以促进细胞增殖、转化,影响细胞凋亡,造成遗传的不稳定,因此我们以c-Myc为治疗癌症的一个重要分子靶标,来筛选有效的治疗癌症的药物。在本研究中,我们首先建立了由c-Myc启动子驱动的荧光素酶报告载体。从Hep G2细胞基因组中扩增了1418bp的c-Myc启动子序列,并将其连接到p GL3-basic载体中,构建了荧光素酶报告载体p GL3-c-Myc。通过荧光素酶活性检测,我们证实了c-Myc启动子具有较高的活性。其次,我们筛选了c-Myc的表达调节剂。将构建的p GL3-c-Myc载体转染入HEK-293T细胞中,采取荧光素酶报告基因法,对本实验室400多种中药化合物进行了筛选。结果发现,化合物TI588和TI101分别对c-Myc启动子的活性有较明显的增强和抑制作用。我们进一步利用RT-PCR和Western Blot法从m RNA水平和蛋白水平上证实了TI588和TI101分别对c-Myc启动子活性的促进和抑制作用。最后,我们对TI101的抗肿瘤作用及机制进行了进一步的研究。MTT结果显示,TI101对人肝癌细胞Hep G2、人正常肝细胞L02的活力均具有抑制作用,且TI101对Hep G2细胞活力的抑制作用高于L02细胞,进一步的研究结果显示,TI101对L02细胞的IC50值为71.101μg/m L,对Hep G2细胞的IC50值为3.137μg/m L。此结果提示,TI101具有一定的开发价值,有可能成为治疗肝癌的候选药物。而后我们揭示了TI101抗肿瘤的机制主要是诱导细胞凋亡和抑制细胞增殖。利用DAPI染色、流式细胞术和免疫印迹分析,证实了TI101通过线粒体途径诱导Hep G2细胞凋亡。通过Brd U掺入实验以及流式细胞术,我们发现TI101可诱导细胞发生G2/M期阻滞,从而抑制Hep G2细胞增殖。综上所述,本研究为选择高效、低毒的抗肿瘤药物提供了一种有效的筛选模型。中药化合物TI101可以诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,本研究为将其进一步开发为治疗癌症的药物提供了理论及实验依据。