Survivin基因RNA干扰联合15-脱氧—前列腺素J2治疗膀胱癌的研究

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[实验目的]:以膀胱癌T24、5637细胞为研究对象,观察Survivin基因RNA干扰与15d-PGJ2对细胞凋亡、Survivin蛋白水平及肿瘤细胞干性等方面的影响,探讨两者联合是否具有更明显的抗肿瘤效应。[实验方法]:采用Survivin基因小分子干扰RNA(siRNA)转染膀胱癌T24、5637细胞。MTT检测不同浓度的15d-PGJ2对细胞的生长抑制效果、平板集落形成实验检测15d-PGJ2对细胞增殖能力的影响。流式细胞术检测15d-PGJ2对细胞周期的影响及Survivin基因RNA干扰单独应用与联合15d-PGJ2对细胞凋亡率的影响。蛋白印迹检测Survivin基因RNA干扰与15d-PGJ2对细胞内Survivin基因表达的影响。成球试验(spheroid formation assay)检测Survivin基因RNA干扰单独应用及联合15d-PGJ2后对肿瘤细胞干性的影响。[实验结果]:(1)靶向Survivin基因小分子干扰RNA可明显抑制T24与5637细胞内Survivin基因的表达;(2)15d-PGJ2对T24与5637细胞的体外生长具有显著的抑制作用(P<0.05);(3)集落形成实验表明0.5ug/ml的15d-PGJ2可明显降低T24、5637细胞的增殖能力;(4)15d-PGJ2对T24与5637细胞具有明显的细胞周期阻滞作用(G2/M期)(P<0.05):(5)15d-PGJ2可降低T24、5637细胞内Survivin蛋白水平;(6)Survivin基因RNA干扰可诱导T24、5637细胞发生凋亡,联合15d-PGJ2可进一步增加凋亡率(P<0.05);(7)15d-PGJ2可进一步增强Survivin基因小分子干扰RNA降低T24与5637细胞的成球能力(P<0.05)。[实验结论]:(1)Survivin基因RNA干扰与15d-PGJ2都可促进细胞凋亡并减少细胞内Survivin蛋白的水平,且15d-PGJ2还具有明显的生长增殖抑制作用及细胞周期阻滞作用(G2/M期)。(2)Survivin基因RNA干扰联合应用15d-PGJ2可进一步促进T24、5637细胞凋亡并降低细胞成球能力。
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