沉默HepG2细胞内源FNBP1基因表达诱导细胞形态重塑

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目的:筛选FNBP1基因的有效siRNA片段,并转入人肝癌细胞HepG2中,观察FNBP1沉默后,HepG2细胞在形态、活力、周期等方面的变化。方法:运用基因芯片、RT-PCR、western blot验证FNBP1在细胞中的存在;合成三组siRNA- FNBP1及阴性对照,转染HepG2细胞,通过RT-PCR筛选最有效干扰片段;转染经筛选有效的siRNA片段,用RT-PCR和Western blot检测siRNA-FNBP1的干扰效率;通过HE染色、XTT、FCM观察转染siRNA- FNBP1后,HepG2细胞在形态、细胞活力及周期等方面的变化。结果:通过基因芯片、RT-PCR及Western blot验证发现,FNBP1在人类肝癌细胞HepG2中稳定表达;通过筛选确定干扰效果最理想的siRNA序列为5’-CCCACUUCAUAUGUCGAAGUCUGUU-3’;干扰后RT-PCR及Western blot检测表明,siRNA序列已将内源FNBP1基因的表达完全沉默。HepG2细胞在其内源FNBP1基因表达被沉默后,细胞形态发生重塑,由上皮样转变为树状分枝的纤维状形态;而细胞活力和细胞周期无显著变化。结论:利用RNA干扰技术(RNA interference technology, RNAi)沉默肝癌细胞HepG2内源FNBP1基因表达以后,其细胞形态发生重塑,由上皮样转变为树状分枝的纤维状,表明FNBP1在细胞形态维持过程中亦具有不可或缺的潜在作用;根据已知的FNBP1蛋白相互作用情况推断,FNBP1可能是通过对肌动蛋白骨架动态组装过程的分子调控参与HepG2细胞的形态控制。
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