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杂交鳢(Channa Maculate♀×Channa Argus♂)味道鲜美、营养价值高,历来倍受消费者的喜爱,但随着养殖密度的增加,杂交鳢疾病频繁爆发,导致杂交鳢大量死亡或体表留有伤疤失去商用价值,在一定程度上限制了杂交鳢养殖业的发展空间。本实验针对2014年发生在广东省中山市三角镇爆发溃疡病的养殖杂交鳢进行采样,通过常规的细菌分离方法、生理生化鉴定、分子生物学鉴定等方法对病原菌进行分析,并开展药物敏感性试验和中草药抑菌、杀菌试验,筛选具有较好抑菌效果的抗生素和中草药。本实验从自然发病的杂交鳢病灶中分离得到1株真菌,命名为G1,真菌G1生长速度较快,菌落结构疏松,菌落表面呈现灰绿色。通过显微镜观察发现:真菌G1主体部分由错综复杂菌丝构成,其中营养菌丝具有明显的分隔,而气生菌丝的某一部分转变为分生孢子梗,分生孢子梗顶端膨大形成球形顶囊,顶囊表面有许多附着着球形分生孢子的小梗,从形态学角度初步鉴定为黄曲霉(Aspergillus flavus)。采用以菌株G1基因组DNA为模板,扩增所测菌株的内转录间隔区序列(Internal Transcribed Spacer,ITS),通过NCBI上Blast检索发现与曲霉属(Aspergillus)相似度最高;利用MAGA 5.0软件采用Neighbor-Joining法,以丝囊霉菌(Aphanomyces invadans)(AY283642.1、EU422990.1、AF396684.1)作为外类群构建系统进化树,结果显示,G1菌株与黄曲霉(EF556205.1)聚为一类,亲缘关系最为接近,而与文献报道的病原丝囊霉菌亲缘关系较远。本实验从自然发病杂交鳢的肝脏、脾脏、肌肉病灶中分别得到1株细菌,分别命名为L9、S8、M7。经过人工感染试验发现,当注射S8菌株菌液浓度高于1.0×107 CFU/尾时,能引起杂交鳢100%死亡,对杂交鳢具有一定的致病效果。S8菌株菌落呈半透明、微隆圆形,菌落边缘整齐、表面光滑,革兰氏染色为阴性。该菌株具有运动性,吲哚反应呈阳性,能够吸收利用麦芽糖、半乳糖和d-甘露醇,氧化酶、精氨酸双水解酶和赖氨酸脱羧酶反应为阳性,鼠李糖、硫化氢、阿拉伯糖、酒石酸、纤维二糖、山梨醇、VP、水杨苷、西蒙氏枸橼酸盐反应呈阴性。本实验使用细菌16S rRNA通用引物,以菌株S8基因组DNA为模板,PCR扩增得到1440 bp大小的基因序列,序列提交NCBI,GenBank登录号为KT036666,登陆NCBI进行Blast比对,通过MAGA 5.0软件,按照Neighbor-Joining法构建系统进化树,数据分析显示,菌株S8与温和气单胞菌(Aeromonas sobria)(KF761305.1)聚为一类,亲缘关系最为接近。以gyrB基因作为病原菌分类鉴定的靶基因,对菌株S8基因组DNA进行扩增,获得1048 bp大小的基因序列,序列提交NCBI,GenBank登录号为KT036667,系统进化树分析结果与16S rRNA基因序列鉴定结果一致,结合菌株S8形态学和生理生化特性,判定该菌株为温和气单胞菌。温和气单胞菌菌株S8抗菌药物敏感性试验表明:阿米卡星、头孢拉啶、左氟沙星、依诺沙星、氧氟沙星、四环素、呋喃妥因、诺氟沙星对菌株S8有较强的抑制作用;卡那霉素、庆大霉素、头孢曲松、新霉素效果次之,氨苄西林、头孢他啶、链霉素、复方新诺明对菌株S8无抑制作用。18种中草药对温和气单胞菌菌株S8的抑菌、杀菌效果显示:石榴皮(Punica granatum)、五倍子(Rhus chinensis)和黄芩(Scutellaria baicalensis)3种中草药对菌株S8抑菌杀菌效果最为显著,最小抑菌浓度(Minimum Inhibitory Concentration,MIC)和最小杀菌浓度(Minimum Bactericidal Concentration,MBC)分别为3.91 mg/mL和7.81 mg/mL;山茱萸(Cornus officinalis)、地榆(Sanguisorba officinalis)和芦荟(Aloe)效果次之,MIC和MBC分别为7.81 mg/mL和15.63 mg/mL;陈皮(Citrus reticulata Blanco)、连翘(Forsythia suspensa)、苏木(Caesalpinia sappan)、山楂(Crataegus pinnatifida)和艾草(Artemisia argyi)抑菌效果较差,而板蓝根(Isatis tinctoria)等7种草药对菌株S8无抑制作用。综上所述,石榴皮、五倍子、黄芩等中草药对温和气单胞菌具有较为明显的抑菌效果,今后可应用于杂交鳢溃疡病防治的生产实践中。