【摘 要】
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由于人类不合理的经营,常常导致森林病虫害周期性大发生,不仅给林业生产带来巨大的经济损失,而且还威胁着生态平衡。在森林害虫防治中以往多采用化学药剂,长期使用化学防治不仅导
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由于人类不合理的经营,常常导致森林病虫害周期性大发生,不仅给林业生产带来巨大的经济损失,而且还威胁着生态平衡。在森林害虫防治中以往多采用化学药剂,长期使用化学防治不仅导致害虫产生耐药性,而且用药量越来越大,形成恶性循环,对自然生态平衡造成严重的破坏,直接威胁着人、畜的安全,同时也增加了防治难度和资金的投入。 抗病虫基因工程的发展为防治病虫害开辟了一条新途径,对于植物的保护作用具有持续性,大大降低了病虫害的抗药性和对环境的污染,有效维护了生物多样性和生态平衡。 本文对东亚钳蝎昆虫毒素ANEP、AGAP在大肠杆菌BL-21中的最佳表达条件以及两种蝎神经性毒素实验室毒力测定进行研究,得出实验结果如下: 1.重组蛋白ANEP的理论分子量为15169.572 Da,Ala、,Cys、Gly和Thr分别占31.25%、13.02%、29.68%、26.04%; AGAP的理论分子量为15786.402 Da,其中Ala占30.3%,Cys占15.15%,Gly占28.78%,Thr占25.75%。 2.利用琼脂糖凝胶电泳对重组菌进行筛选,得到分布在标准DNA片断100bp到250bp之间的扩增基因条带,重组质粒成功转化到表达菌体中。 3.通过均匀设计实验,得出蝎神经性毒素ANEP最佳表达条件为:表达时间6h,诱导物浓度1mmol/L,菌液比例1:50,菌液OD值0.7;得出蝎神经性毒素AGAP的最佳表达条件为:表达时间6h,诱导物浓度0.5mmol/L,菌液比例1:100,菌液OD值0.5。 4.蝎神经性毒素ANEP200倍稀释液对于分月扇舟蛾,榆紫叶甲,落叶松毛虫的校正死亡率分别为84.48%,79.31%,83.05%;蝎神经性毒素AGAP200倍稀释液对于分月扇中蛾,榆紫叶甲,落叶松毛虫的校正死亡率分别为82.76%,68.97%,81.36%。 5.2种蝎神经性毒素重组蛋白对3种森林害虫均具有一定的杀虫效果,但ANEP杀虫效果均好于AGAP。AGAP对分月扇舟蛾的效果最佳,5种浓度的幼虫死亡率为51.72%-84.48%,对榆紫叶甲幼虫的毒力最差。
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