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第一部分高表达肝细胞生长因子的间充质干细胞对ARDS小鼠肺内树突状细胞成熟及肺损伤的影响目的 明确高表达肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）的间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）对急性呼吸窘迫综合征（acute respiratory distress syndrome,ARDS）小鼠肺部树突状细胞（dendritic cells,DCs）成熟及肺损伤的影响。方法 将203只C57BL/6小鼠随机分为（1）Control组（2）ARDS组（3）MSCs治疗组（4）NC-HGF-MSCs治疗组（5）HGF-MSCs治疗组（6）NC-sh HGF-MSCs治疗组（7）sh HGF-MSCs治疗组。各治疗组首先尾静脉分别注射5×105个MSCs、NC-HGF-MSCs、HGF-MSCs、NC-sh HGF-MSCs、sh HGF-MSCs,后立即气道滴注5 mg/kg LPS诱导小鼠ARDS模型。记录各组20只小鼠的7天存活数量评价7天病死率。其余小鼠在造模12h后分别进行以下处理:（1）处死前对小鼠行脓毒症评分（MSS）;（2）留取肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）,计数其中总细胞数,BCA法测总蛋白浓度,Elisa法测IL-1β、IL-6浓度变化;（3）留取肺组织,计算肺总重量/体重比（LWW/BW）,取右上肺行HE染色和肺损伤Smith评分,行Masson染色和肺纤维化Ashcroft评分;（4）制备肺组织单细胞悬液,检测肺内DCs成熟度,通过Person相关系数分析与Smith评分进行相关性分析;检测肺内T细胞活化程度。结果 （1）高表达HGF促进MSCs降低ARDS小鼠病死率。较ARDS组50%病死率,MSCs组30%病死率无明显差异（P>0.05）,但有下降趋势;HGF-MSCs组20%病死率呈显著下降趋势（P<0.05）。（2）高表达HGF促进MSCs减轻ARDS小鼠肺损伤。各治疗组小鼠MSS评分均显著低于ARDS组（P<0.05）,但治疗组之间无明显差异;与MSCs组Smith评分5.33分相比,HGF-MSCs组显著下降至3.33分,而sh HGF-MSCs组显著上升至8分（P<0.05）。（3）HGF-MSCs可以改善ARDS小鼠肺水肿和肺通透性。HGF-MSCs组小鼠LWW/BW,以及BALF中总细胞数、总蛋白量均较ARDS组显著下降,而sh HGF-MSCs组较HGF-MSCs组显著上升（P<0.05）。（4）高表达HGF促进MSCs降低ARDS小鼠肺内促炎因子表达。HGF-MSCs组肺内IL-1β、IL-6表达较MSCs组、sh HGF-MSCs组均有显著下降（P<0.05）。（5）HGF-MSCs可以减轻ARDS小鼠肺纤维化。与ARDS组相比,MSCs组与HGF-MSCs组Ashcroft评分均显著降低（P<0.05）。（6）高表达HGF促进MSCs抑制肺内DCs成熟,且DCs成熟度与肺损伤呈正相关。HGF-MSCs组DCs细胞成熟表型CD40为46.27%,较MSCs组56.42%下降,较sh HGF-MSCs组62.65%亦显著下降（P<0.05）;DCs成熟表型CD40比例与肺损伤Smith评分呈正相关（R2=0.791,P<0.001）。（7）高表达HGF促进MSCs抑制肺内T细胞活化。HGF-MSCs组CD3+T细胞活化指标CD44较MSCs组的2.75%显著下降至1.18%,较sh HGF-MSCs组4.58%亦显著下降（P<0.05）。结论 高表达HGF可显著增强MSCs对ARDS小鼠肺内DCs成熟的抑制能力,减轻肺损伤。第二部分间充质干细胞分泌肝细胞生长因子促进自身Jagged-1表达对树突状细胞成熟的影响目的 评价肝细胞生长因子（hepatocyte growth factor,HGF）及Jagged-1蛋白在小鼠骨髓来源间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）影响树突状细胞（dendritic cells,DCs）成熟中的作用及相关机制。方法 （1）获取纯化的未成熟树突状细胞:提取小鼠骨髓来源的单个核细胞,诱导分化为im DCs,通过磁珠分选法或Percoll密度梯度离心法进行纯化。（2）LPS微环境中,MSCs抑制DCs成熟:在50ng/ml LPS微环境中,纯化的im DCs与MSCs共培养48h后,通过流式细胞术检测DCs表型、吞噬功能、刺激淋巴细胞增殖能力的变化。（3）LPS微环境中,高表达HGF的MSCs抑制DCs成熟:将纯化的im DCs分别与高表达HGF的MSCs及其空载体对照组MSCs（HGF-MSC、NC-HGF-MSCs）、低表达HGF的MSCs及其空载体对照组MSCs（sh HGF-MSCs、NC-sh HGF-MSCs）共培养48h,同时加入50ng/ml LPS刺激,检测DCs表型变化。（4）LPS微环境中,MSCs通过Jagged-1抑制DCs成熟:将纯化的im DCs分别与MSCs、Jagged-1、Jagged-1中和抗体MHJ1-29共培养48h,同时加入50ng/ml LPS刺激,检测DCs表型变化。（5）HGF通过Akt信号增加MSCs中Jagged-1表达:Western blot检测HGF-MSC（高表达HGF的MSCs）、NC-HGF-MSCs、sh HGF-MSCs（低表达HGF的MSCs）、NC-sh HGF-MSCs中c-Met、p-Met、Akt、p-Akt、Jagged-1表达水平差异。用Akt抑制剂MK2206作用于MSCs后,检测MSCs表达Jagged-1水平的变化。结果 （1）LPS微环境中,MSCs抑制DCs的成熟。MSCs能显著降低DCs的成熟表型,增强其吞噬功能,抑制其刺激淋巴细胞增殖的能力（P<0.05）。（2）LPS微环境中,高表达HGF的MSCs进一步抑制DCs成熟。与空载体组相比,HGF-MSCs可以进一步显著降低DCs成熟表型,CD40由79.42%下降至72.67%,CD86由91.68%下降至62.49%,同时DCs吞噬功能由23.39%上升至27.70%（P<0.05）;而sh HGF-MSCs则显著提升DCs的成熟表型,CD40由77.78%上升至94.23%,CD86由88.87%上升至96.10%,同时DCs吞噬功能由19.61%下降至15.17%（P<0.05）。（3）LPS微环境中,MSCs通过Jagged-1抑制DCs成熟。与LPS组相比,Jagged-1组DCs成熟表型显著降低,CD40由78.73%下降至65.70%、CD86由87.21%下降至75.51%（P<0.05）;而与MSCs组相比,Jagged-1中和抗体MHJ1-29组DCs成熟表型显著升高,CD40由82.78%上升至91.34%、CD86由62.27%上升至88.38%（P<0.05）。（4）HGF通过Akt信号增加MSCs中Jagged-1表达。与空载体组相比,HGF-MSCs组表达p-Met、p-Akt、Jagged-1明显增加,sh HGF-MSCs组表达p-Met、p-Akt、Jagged-1明显减少（P<0.05）。经Akt抑制剂MK2206处理后的MSCs表达Jagged-1显著下降（P<0.05）。结论 MSCs分泌HGF通过Akt通路促进自身Jagged-1表达,抑制DCs的成熟。