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反刍动物中,妊娠识别与机体内大量基因调控的改变有关。干扰素诱导基因15(ISG15)作为一种泛素类似蛋白可以通过ISGylatio n相关酶UBE1L和UBCH8连接到多种蛋白质。我们猜测在妊娠奶牛体内发生妊娠识别时,ISG15及ISGlytion相关酶UBE1L和UBCH8可能与非妊娠奶牛的表达调控存在不同之处。本项研究的目的在于检测ISG15与ISGylation目关酶在妊娠与非妊娠奶牛中的表达模式,为奶牛的早期妊娠诊断提供新的分子依据。同时,还进行了奶牛血液中单核淋巴细胞的体外培养实验,选取了不同浓度的干扰素τ(IFNT)对细胞进行处理后检测ISG15、UBE1L及UBCH8的表达变化。结果显示,IFNT显著地上调了ISG15、UBE1L和UBCH8基因的表达。同时,选取了30头奶牛进行同期发情处理,并进行了人工授精,并随机选取了12头健康的未妊娠母牛作为对照组不进行人工授精。当人工授精后的第18天,分别采取实验组和对照组中奶牛的血液,并对其中的单核细胞进行ISG15、UBE1L和UBCH8基因的检测。授精45天后,通过直肠检查方式检查奶牛的妊娠情况。结果显示,妊娠奶牛(13头)中ISG15、UBE1L及UBCH8基因的表达量与未妊娠奶牛(17头)及对照组奶牛(12头)相比明显上调,其中授精后未妊娠奶牛与对照组奶牛中检测基因的表达无明显差异。综上所诉,母体妊娠后的胚胎可以通过分泌IFNT作用于血液中的单核淋巴细胞,从而上调了ISG15、UBE1L和UBCH8等基因的表达,而且上述三个基因可以作为奶牛早期妊娠诊断的分子标志。卵母细胞可以完成成熟、受精、生成囊胚直至产生健康的新生命,而卵丘颗粒细胞对上述过程的完成有着重要作用。移除卵丘细胞后,能够显著地影响卵母细胞的成熟及后期发育。而且,卵丘细胞的特性及功能被卵母细胞紧密调控,并且可以反映卵母细胞的成熟程度。我们猜测卵丘细胞内基因表达及信号通路情况可以反映配子的质量,通过利用分子生物学检测方式如RNA干扰、qRT-PCR及基因通路生物信息学分析等,着重研究了在应激条件下卵丘细胞内基因表达的改变及其内在调控机制。本研究首要的目标是探索热应激怎样调控HSP70的表达。研究结果显示,卵丘细胞在42℃热应激30 min后可以上调HSP70的表达。同时,添加FSH处理细胞后可以下调HSP70,说明FSH可能参与了HSP70的调控。其次,在热应激时添加了FSH,上调了IFNT基因的表达。综合上述结果得出IFNT基因可以参与了HSP70基因的调控。利用RNA干扰技术,当对卵丘细胞内IFNT基因进行敲降后,发现FSH不能在热应激后下调HSP70的表达。因此,FSH不仅促进了IFNT基因的表达,而且可以通过前者可以调控HSP70的表达。健康的卵丘细胞对于卵母细胞的质量非常重要,全面的了解卵丘细胞内的信号通路及基因调控有利于对卵母细胞发育进行检测,还可以作为评估以后的胚胎发育的分子指标。