草莓成花相关基因的克隆及表达分析

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:owen_0278
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成花的时间及质量直接影响栽培草莓的产期及产量,是草莓生产中的关键环节,但目前多从生理角度和栽培角度来阐述外界因素对草莓花芽分化的影响,对其成花的分子调控机理知之甚少。随着对模式植物拟南芥和金鱼草开花机理的深入研究,一系列植物与开花相关的基因被分离鉴定,其中AP1类、LFY类、TFL1类、FT类和CO类同源基因在高等植物的成花过程中发挥着极其重要的作用。本研究利用同源克隆、RACE结合特异扩增的方法从栽培草莓品种‘花姬’中分离得到了上述5个同源基因的全长序列;利用实时定量PCR技术研究了这5个基因在草莓不同组织、器官及不同花发育阶段的表达情况,为深入了解和阐述草莓的成花分子机理奠定了基础。主要研究结果如下:1.采用同源克隆的方法从草莓基因组DNA中扩增得到了AP1类、LFY类和TFL1类同源基因片段,其长度分别为464bp、986bp和1025bp,它们与其他的植物的AP1类、LFY类和TFL1类同源基因具有较高的同源性。2.利用RACE结合特异RT-PCR的方法从栽培草莓中分离出了AP1类、LFY类、TFL1类、FT类及CO类同源基因cDNA全长序列,分别将其命名为:FaAP1、FaLFY、FaTFL1、FaFT和FaCO-2。其中,FaAP1的CDS长度为735bp,编码245氨基酸,氨基酸序列与蔷薇科的玫瑰同源性最高,到达90.9%,氨基酸序列包含MADS-box基因家族成员的典型结构域;FaLFY的CDS长度为1236bp,编码412个氨基酸,氨基酸序列与蔷薇科的玫瑰同源性最高,到达88%,氨基酸结构上在N-端和C-端包含有2个高度保守的区域;FaTFL1CDS长516bp,编码172个氨基酸,核酸序列与野生二倍体森林草莓同源性最高,达到98%,氨基酸编码序列包含保守的磷脂酰乙醇胺结合域,属于PEBP基因家族蛋白序列;FaFT的CDS长度为528bp,编码176个氨基酸,核酸序列与野生二倍体森林草莓的同源性最高,达到98%,其氨基酸序列也包含保守的的磷脂酰乙醇胺结合域,属PEBP基因家族蛋白;FaCO-2CDS长为1146bp,编码382个氨基酸,其氨基酸序列具有典型的植物CO家族结构特点。3.根据已获得的cDNA序列,设计特异引物扩增得到了上述五个基因的DNA编码区全长序列。FaAP1DNA编码区序列全长为2911bp,有8个外显子,7个内含子;FaLFYDNA编码区序列长为2250bp,有3个外显子,2个内含子;FaTFL1DNA编码区序列长1138bp,有4个外显子,3个内含子;FaFT DNA编码区长度为2104bp,有4个外显子,3个内含子;FaCO-2DNA序列长度为1882bp,有2个外显子,1个内含子。4.利用实时定量RT-PCR方法分别检测了这5个基因在草莓不同组织、不同花器官及不同发育阶段花中的表达情况。FaAP1主要在花蕾中表达,花器官中在萼片和花瓣中表达,在营养生长的组织内不表达或表达量很小;FaLFY主要在生殖生长的组织中表达,其中花芽中表达量最高,而在营养生长组织和花器官中不表达;FaTFL1在营养生长的芽及生殖生长的花芽、花及幼果中都有表达,在匍匐茎的芽中的表达量最高,而在花器官中都不表达;FaFT主要在生殖生长的组织中表达,其中在成熟的花中表达量最高,而在营养生长的叶片等组织中表达量很少;FaC0-2在营养生长和生殖生长的组织中都有表达,主要在叶片中表达,其中在充分展开的较大叶片中的表达量最高,其次在幼叶的表达较高,在四轮花器官中,萼片中的表达较高。5.通过染色体步移的方法分离得到了FaAP1启动子长度约700bp的启动子序列,预测分析表明其启动子序列中包含了基本作用元件TATA-box、增强子CAAT-box和植物分生组织特异调控元件CCGTCC-box等多个顺式作用元件。
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