论文部分内容阅读
目的:本课题选择前期研究制备的凝集素修饰的苦参碱纳米粒(WGA-MT-NPS)作为研究对象,利用凝集素对癌细胞的特异性亲和作用,对结肠癌HT29细胞的作用进行评价,了解WGA-MT-NPS对癌细胞的作用机理,为口服结肠癌生物黏附靶向给药系统的研究奠定基础。方法:(1)WGA-MT-NPS的制备表征及凝集活性考察制备WGA-MT-NPS,以粒径、粒度分布、电位对其进行评价,并考察凝集素修饰在苦参碱纳米粒上之后的活性变化。(2)WGA-MT-NPS对结肠癌HT29细胞增殖的影响采用四唑盐比色法(MTT),以OD值为指标研究MT-NPS用WGA修饰前后对结肠癌HT29细胞的细胞增殖的抑制作用。(3)WGA-MT-NPS对结肠癌细胞HT29凋亡的影响采用Annexin V-FITC/PI双染法,利用流式细胞仪考察各组MT-NPS与WGA-MT-NPS对HT29细胞凋亡的影响,并利用Flow Jo软件进行分析。(4)WGA-MT-NPS对结肠癌细胞HT29细胞周期的影响采用PI染色法,利用流式细胞仪考察各组MT-NPS与WGA-MT-NPS对HT29细胞周期的影响,并利用ModFit软件进行分析。(5)WGA-MT-NPS对结肠癌细胞HT29和人正常结肠上皮细胞NCM460的不同亲和作用研究用fWGA-MT-NPS分别作用于HT29细胞和NCM460细胞,利用荧光染料染色,在共聚焦显微镜下观察药物与两种细胞的亲和作用情况。结果:按照最佳工艺制备出的三批MT-NPS粒径分别为102.6nm、104.6nm和101.6nm,电位分别为-17.5mV、-12.2mV、-12.5 mV,三批WGA-MT-NPS粒径分别为234.7nm、235.1nm和231.9nm电位分别为-9.51mV、-7.85mV、-7.54 mV,经考察WGA修饰在MT-NPS上后,凝集素的凝血活性没有发生变化;WGA-MT-NPS相对于HT29癌细胞增殖的抑制作用更强,且有明显的量效关系;相同含药浓度下WGA-MT-NPS相对于MT-NPS,结肠癌细胞HT29的凋亡率更高;药物将细胞周期阻滞在G0/G1期,阻碍了细胞DNA的合成,且WGA-MT-NPS比MT-NP G0/G1期有更高的细胞量;共聚焦显微镜下观察发现,结肠癌细胞HT29视野中的绿色荧光强度明显强于人正常结肠上皮细胞NCM460。结论:WGA对纳米粒修饰后,仍保持了其特异糖基结合活性;WGA-MT-NPS对HT29细胞增殖的抑制作用比MT-NPS更强,并具备更强的促进其凋亡作用和细胞周期阻滞作用;HT29细胞对WGA-MT-NPS的摄取明显强于正常结肠上皮细胞NCM460。说明WGA对MT-NPS修饰后具有较为明显的结肠癌细胞靶向性和选择性杀伤作用。