胃癌目前处于恶性消化系统肿瘤前列,死亡率也日趋升高,腺癌是胃癌中最常见的一种病理分型,其发生、发展涉及多种复杂机制,其中主要包括细胞死亡异常和细胞增殖异常等。细胞死亡形式包括很多种,目前研究的热点主要是细胞凋亡,细胞凋亡即受到严格调节的细胞主动发生坏死的死亡方式,是一种被特异性的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspases家族)激活的细胞死亡形式,由于细胞凋亡这种死亡形式需要严格控制,故Caspase家族的活性也同样受到了严格的调控。Caspase-8是死亡受体介导的细胞凋亡中的启动因子,在多种恶性肿瘤中出现表达异常。TRAF2是生物学上重要的细胞凋亡抑制因子,但抑制凋亡的机制不是十分明确,其中目前研究发现其主要通过激活NF-KB途径诱导下游凋亡抑制因子的上调从而调控细胞凋亡。Bid是一个只有BH3结构域的促凋亡Bcl-2家族的成员,是将死亡受体途径与线粒体途径联系起来的一种重要蛋白。TRAF2和Bid在不同恶性肿瘤中也均存在表达异常。目前关于TRAF2在胃腺癌组织的表达国内报道较少,Caspase-8在胃腺癌中的研究方法主要是免疫组化SP法,联合蛋白印迹、免疫组化SP法以及qRT-PCR三种实验技术检测胃癌中Caspase-8表达的研究国内暂无报道,目前国内对Bid在胃腺癌组织中的表达研究主要在蛋白水平,关于胃腺癌组织中Bid mRNA的研究较少,联合三种实验方法研究TRAF2、Caspase-8及Bid在胃腺癌中的表达及三者之间的相关性研究也未见报道。因此本研究通过免疫组织化学SP法、蛋白印迹(Western blot)及实时荧光定量PCR(qRT-PCR)三种实验技术分别研究TRAF2、Caspase-8及Bid在胃腺癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中蛋白及基因水平的表达情况并探究三者在胃腺癌组织中与临床病理特征之间的关系以及分析三者之间的相关性,从而有可能为胃腺癌患者提供早期诊断和预后的联合分子指标,甚至有可能为临床治疗提供新靶点。目的:通过研究TRAF2、Caspase-8及Bid在胃腺癌组织和癌旁正常胃黏膜组织中的表达情况,并探讨三者在胃腺癌中与临床病理特征之间的关系以及分析三者之间的相关性。方法:1通过免疫组织化学SP法检测TRAF2蛋白、Caspase-8蛋白和Bid蛋白在不同胃组织中的表达水平,探讨三者在胃腺癌组织中的表达水平及与临床病理特征之间的关系,并分析在胃腺癌组织中三者之间的相关性。2通过Western blot技术检测TRAF2蛋白、Caspase-8蛋白和Bid蛋白在不同胃组织中的表达水平,探究三者在胃腺癌组织中的表达水平及与临床病理特征之间的关系,并分析在胃腺癌组织中三者之间的相关性。3通过qRT-PCR技术检测TRAF2 mRNA、Caspase-8 mRNA和Bid mRNA在不同胃组织中的表达水平,讨论三者在胃腺癌组织中的表达水平及与临床病理特征之间的关系,并分析在胃腺癌组织中三者之间的相关性。结果:1免疫组化结果显示:胃腺癌组织中TRAF2蛋白、Caspase-8蛋白和Bid蛋白阳性表达率分别为76.7%、66.7%和70%;癌旁正常胃黏膜组织中TRAF2蛋白、Caspase-8蛋白和Bid蛋白阳性表达率分别为32.1%、90.9%和87.3%;与癌旁正常胃黏膜相比,胃腺癌中TRAF2蛋白阳性表达率与阳性表达强度均上调,然而Caspase-8蛋白和Bid蛋白阳性表达率及阳性表达强度均下调,差别均有统计学意义(P<0.05,P<0.05,P<0.05)。1.1在胃腺癌组织中TRAF2蛋白、Caspase-8蛋白及Bid蛋白三者表达与患者性别、年龄均无关,差别均无统计学意义(P>0.05,P>0.05),而与胃腺癌的分化程度、TNM临床分期、淋巴结转移及浸润深度均有关,差别均有统计学意义(P<0.05,P<0.05,P<0.05,P<0.05)。1.2胃腺癌组织中TRAF2蛋白、Caspase-8蛋白和Bid蛋白表达的相关性在胃腺癌组织中TRAF2蛋白和Caspase-8蛋白的表达情况呈负相关性,差别具有统计学意义(r_s=-0.630,P<0.05);在胃腺癌组织中Caspase-8蛋白和Bid蛋白的表达情况呈正相关性,差别有统计学意义(r_s=0.465,P<0.05);在胃腺癌组织中TRAF2蛋白和Bid蛋白的表达情况无相关性,差别无统计学意义(P>0.05)。2 Western blot实验技术检测结果显示:与癌旁正常胃黏膜组织相比,胃腺癌组织中TRAF2蛋白的相对表达量明显上调,然而Caspase-8蛋白和Bid蛋白的相对表达量均显著下降,差别均有统计学意义(P<0.05,P<0.05,P<0.05)。2.1在胃腺癌组织中TRAF2蛋白、Caspase-8蛋白及Bid蛋白三者的表达与患者性别、年龄均无关,差别均无统计学意义(P>0.05,P>0.05,P>0.05),而与胃腺癌的分化程度、TNM临床分期、淋巴结转移及浸润深度均有关,差别均有统计学意义(P<0.05,P<0.05,P<0.05,P<0.05)。2.2胃腺癌组织中TRAF2蛋白、Caspase-8蛋白及Bid蛋白表达的相关性在胃腺癌组织中TRAF2蛋白和Caspase-8蛋白表达之间呈负相关性,有统计学意义(r_s=-0.682,P<0.05)。在胃腺癌组织中Caspase-8蛋白和Bid蛋白表达之间呈正相关性,有统计学意义(r_s=0.915,P<0.05)。在胃腺癌组织中TRAF2蛋白和Bid蛋白的表达之间无明显相关性,无统计学意义(P>0.05)。3 qRT-PCR实验技术检测结果显示:与癌旁正常胃黏膜组织相比,胃腺癌组织中TRAF2 mRNA的相对表达量显著上调,然而Caspase-8 mRNA和Bid mRNA相对表达量明显下调,差别都具有统计学意义(P<0.05,P<0.05,P<0.05)。3.1在胃腺癌组织中TRAF2 mRNA、Caspase-8 mRNA及Bid mRNA三者的表达与患者性别、年龄均无关,差别均无统计学意义(P>0.05,P>0.05),而与胃腺癌的分化程度、TNM临床分期、淋巴结转移及浸润深度均有关,差别均有统计学意义(P<0.05,P<0.05,P<0.05,P<0.05)。3.2胃腺癌组织中TRAF2 mRNA、Caspase-8 mRNA及Bid mRNA表达的相关性在胃腺癌组织中TRAF2 mRNA、Caspase-8 mRNA及Bid mRNA三者之间均无明显相关性,差别无统计学意义(P>0.05,P>0.05,P>0.05)。结论:1在胃腺癌组织中TRAF2蛋白及mRNA的表达水平均较正常胃黏膜组织上调,然而在胃腺癌组织中Caspase-8、Bid的蛋白及mRNA表达则呈下调趋势,三者均与分化程度、TNM临床分期、淋巴结转移及浸润深度等胃腺癌临床病理特征有关,这提示TRAF2、Caspase-8及Bid这三个因子均参与了胃腺癌的发生、发展,在胃腺癌的演变过程中扮演着重要角色。2通过分析免疫组化SP法和蛋白印迹技术的实验结果,得出结论:两种实验方法结果一致,均提示胃腺癌组织中TRAF2蛋白和Caspase-8蛋白表达之间存在负相关,Caspase-8蛋白与Bid蛋白表达之间存在正相关,TRAF2蛋白和Bid蛋白之间无统计学相关,这些结果表明在调节胃腺癌细胞凋亡的过程中TRAF2蛋白和Caspase-8蛋白可能存在拮抗作用,Caspase-8蛋白与Bid蛋白可能存在协同作用,TRAF2和Bid蛋白之间可能存在其他复杂的凋亡调节信号。3通过统计学分析qRT-PCR实验结果得出结论:胃腺癌组织中TRAF2 mRNA、Caspase-8 mRNA与Bid mRNA三者之间均无相关性,提示三者之间在基因水平可能不直接发生互相调节,它们之间可能存在更多的其他调节通路。