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第一部分：hGSTP1-1及其半胱氨酸突变体的原核表达载体构建、诱导表达、纯化和部分性质研究
人胎盘型谷胱甘肽S-转移酶(GST P1-1、GST-π、GST-pi)是人体内GSTs的一种重要的活性亚型，因其首先在人体胎盘(placenta)中被克隆而得名。GST P1-1在多种肿瘤组织细胞和转化的细胞株中丰度极高，且与肿瘤细胞的耐药性密切相关。对GST P1-1的早期研究，集中在分子空间结构及其多态性和催化活性与上述人类疾病的关系，是目前人类GSqlS所有研究中最为广泛和深入的一种亚型。
本实验构建了Ecoli重组表达载体pET-28a-His<,6>-hGST P1-1、 pET-28a-His<,6>-hGST P1-1、pET-28a-His<,6>-hGST P1-1、 pET-28a-His<,6>-hGST P1-1-hGST P1-1和 pET-28a-His<,6>-rEK-hGST P1-1。并在Ecoli BL21(DE3)中实现了高效诱导表达，靶蛋白约占菌体总蛋白的30-50％。并初步建立了His<,6>-hGST P1-1蛋白纯化工艺，利用该工艺路线我们可以从1 L细菌诱导物中最终获得50-60 mg纯度大于93％的 His<,6>-hGST P 1-1蛋白，转移酶活性及对底物GSJ和CDNB亲和常数K<,m>与已报道的重组hGST P1-1和从人胎盘纯化的hGST P1-1相似，为进一步研究His<,6>-hGST P1-1的性质奠定了坚实的基础。
实验结果表明：hGST P1-1半胱氨酸的突变并未使酶的催化活性完全丧失，但在一定程度上抑制了hGST P1-1对底物GSH和CDNB亲和力，因此半胱氨酸并不是hGST P1-1发挥转移酶活性所必需的，但的确影响了酶的催化效率。另外，热稳定性研究推测Cys169在维持酶的热稳定性方面发挥重要作用。研究揭示：hGST P1-1在氧化应激时单体间通过Cys417和Cys101间形成二硫键，之后进一步使Cys14和Cysll69间形成单体间二硫键。
第二部分：两种EGFP-hsTRAIL融合蛋白表达载体的构建、融合蛋白纯化、生物学活性分析
氧化型人胎盘型谷胱甘肽S-转移酶肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand， TRAIL/Apo2L)属于肿瘤坏死因子超基因家族成员。TRAIL及其受体在诱导肿瘤细胞凋亡的同时，能保护正常细胞而免于细胞毒副反应，是一种具有开发潜力的新的抗肿瘤药物。
本实验室从MegaMan人转录组文库(MegaMan Human Transcriptome Library)中扩增得到了表达人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(hTRAIL)胞外可溶性功能区(114位氨基酸残基至281位氨基酸残基，命名为sTR114和95位氨基酸残基至281位氨基酸残基，命名为sTR95)的cDNA序列，通过重叠延伸PCR将TR95s和TR114s的cDNA序列分别与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因融合，并将此融合基因克隆至pET-28a表达载体中。融合蛋白(EGFP-sTR95和EGFP-sTR114)诱导表达后通过IDA-Ni<2+>亲和层析柱纯化得到的EGFP-sTR95和EGFP-sTR114这两种融合蛋白在体外诱导多种肿瘤细胞系凋亡的活性。由于并融合蛋白保留了EGFP的荧光活性，可用于检测细胞表面表达TRAIL受体的各种细胞系。