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目的:本研究通过检测食管鳞癌组织中CDC25A、CDC25B、TGF-beta、Smad3的表达及细胞凋亡率、细胞增殖指数,探讨:①CDC25A、CDC25B、Smad3、TGF-beta与食管癌发生发展的关系。②CDC25A、CDC25B、Smad3、TGF-beta表达的相互关系。③CDC25A蛋白含量、定位及CDC25B蛋白含量与细胞凋亡率、增殖指数的关系;通过建立裸鼠Eca-109食管鳞癌移植瘤模型,探讨青蒿琥酯(artesunate,Art)对食管癌的体内抑制作用和机制。方法:1应用免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)S-P法检测52例食管鳞状细胞癌、25例不典型增生组织和24例正常食管粘膜中CDC25A、CDC25B、TGF-beta蛋白的表达。2应用流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)定量检测30例食管鳞状细胞癌和5例正常食管粘膜中CDC25A、CDC25B、Smad3的蛋白含量、细胞凋亡率和细胞增殖指数。3构建食管癌裸鼠移植瘤模型,观察Art对移植瘤的抑制情况,计算抑瘤率。免疫组化SP法检测CDC25A、CDC25B蛋白表达变化,病理常规HE染色光镜下观察移植瘤改变。结果:1 CDC25A在不同食管组织中的表达应用IHC法检测52例食管鳞状细胞癌、25例不典型增生组织和24例正常粘膜中CDC25A的表达,结果显示:CDC25A在癌组织中的阳性表达率(50.0%)明显高于非典型增生组织(16.0%)和正常粘膜(0%)(P<0.01),后二者之间差别无显著性(P>0.05)。CDC25A的表达与患者的性别、年龄无关(P>0.05),但与细胞分化程度(P<0.01)、纤维膜浸润(P<0.01)、淋巴结转移有关(P<0.05)。应用FCM法对30例食管鳞状细胞癌和5例正常粘膜中CDC25A蛋白含量(Fluscence Index,FI)的检测结果显示:癌组织中CDC25A蛋白含量(1.15±0.09)高于正常粘膜(1.00±0.06)(P<0.01)。且CDC25A蛋白含量与浸润深度(P<0.05)、淋巴结转移(P<0.01)有关,而与细胞分化程度和患者的性别、年龄无关(P>0.05),此结果与IHC结果基本一致。2 CDC25B在不同食管组织中的表达应用IHC法检测52例食管鳞状细胞癌、25例非典型增生组织和24例正常粘膜中CDC25B蛋白的表达,CDC25B在癌组织中的阳性表达率(48.1%)明显高于非典型增生组织(16.0%)和正常粘膜(0%)(P<0.01),后二者之间差别无显著性(P>0.05)。CDC25B的表达与患者的性别、年龄、淋巴结转移无关,但与细胞分化程度、浸润深度相关(P<0.01)。应用流式细胞术(FCM)对30例食管鳞癌和5例正常粘膜中CDC25B蛋白含量(FI)的检测结果显示:CDC25B蛋白在癌组织( 1.11±0.11 )中的含量高于正常粘膜(1.00±0.06)(P<0.05);但其蛋白含量仅与食管鳞癌浸润深度有关(P<0.05),与细胞分化程度、淋巴结转移及患者性别、年龄均无关(P>0.05),此结果与IHC结果基本一致。3 TGF-beta在不同食管组织中的表达应用IHC法检测52例食管鳞状细胞癌、25例非典型增生组织和24例正常粘膜TGF-beta蛋白的表达,癌组织中的TGF-beta蛋白阳性表达率(67.3%)明显高于非典型增生组织(36.0%)和正常粘膜(33.3%)(P<0.01),后二者差别无显著性(P>0.05)。TGF-beta蛋白的表达与淋巴结转移相关(P<0.05),与浸润深度、分化程度及患者性别、年龄无关(P>0.05)。4 Smad3在不同食管组织中的表达应用FCM法检测30例食管鳞状细胞癌和5例正常粘膜中Smad3蛋白含量(FI),结果显示: Smad3蛋白在癌组织(0.92±0.06)中的含量低于正常粘膜(1.00±0.07)(P<0.05);但其含量与食管鳞癌组织的浸润深度、细胞分化程度、淋巴结转移及患者性别、年龄无关(P>0.05)。5食管鳞状细胞癌中CDC25A蛋白与CDC25B蛋白的表达无明显相关关系(x2=3.78, P>0.05)(IHC)。6食管鳞状细胞癌中TGF-beta蛋白与CDC25A蛋白的表达无明显相关关系(x2=2.19, P>0.05)(IHC)。7食管鳞状细胞癌中TGF-beta蛋白与CDC25B蛋白的表达无明显相关关系(x2=3.53, P>0.05)(IHC)。8食管鳞状细胞癌中CDC25A蛋白与Smad3蛋白含量之间呈负相关关系(r=-0.482, P<0.01)(FCM)。9 CDC25A蛋白含量(FI)与细胞凋亡率和细胞增殖指数的关系(FCM)。CDC25A蛋白含量(FI)与细胞凋亡率无相关关系(P>0.05)。但按IHC结果将对应的30例标本分为胞浆CDC25A蛋白阳性表达组和胞浆CDC25A蛋白阴性表达组分析发现,胞浆CDC25A蛋白阳性表达组的细胞凋亡率(6.62±2.01)低于胞浆CDC25A蛋白阴性表达组(8.53±4.32),但无统计学意义(P>0.05)。CDC25A蛋白含量(FI)与细胞增殖指数不相关(P>0.05),按IHC结果将30例标本分为CDC25A蛋白核膜阳性表达组和核膜阴性表达组分析发现,CDC25A蛋白核膜阳性表达组的细胞增殖指数(30.71±12.04)明显高于CDC25A蛋白胞核膜阴性表达组(21.78±8.22)(P<0.01)。10 CDC25B蛋白含量(FI )与细胞凋亡率、细胞增殖指数均无相关关系(P>0.05)(FCM)。11 CDC25B蛋白与Smad3蛋白之间无相关关系(FCM) (P>0.05)。12 Art对人食管癌裸鼠移植瘤的生长影响及其机制⑴成功构建出人食管癌裸鼠移植瘤模型,成瘤率达100%。⑵Art显著抑制移植瘤的生长:100mg/kg、200mg/kg、300mg/kgArt组的体积抑瘤率分别为30.30%、74.76%、36.36%,重量抑瘤率分别为29.35%、65.22%、32.61%,顺铂体积抑瘤率为74.75%,重量抑瘤率为64.13%。200mg/kgArt浓度抑瘤效果最佳,与顺铂作用相似。⑶CDC25A阳性标记率,Art治疗组均低于生理盐水组(P<0.05), 200mg/kgArt组低于100mg/kgArt组和300mg/kgArt组( P<0.05 ),100mg/kgArt组和300mg/kgArt组无差异(P>0.05)。⑷CDC25B在各组均表达,各组阳性标记率差异无显著性(P>0.05)。结论:1 CDC25A在食管鳞状细胞癌中的表达明显高于非典型增生组织和正常粘膜,提示CDC25A过表达可能与食管癌的发生有关;CDC25A表达与细胞分化程度、浸润深度、淋巴结转移相关,提示CDC25A可能参与调节食管癌的恶性表型,并促进食管癌的浸润与转移。2 CDC25B在食管鳞状细胞癌中的表达明显高于非典型增生组织和正常粘膜,提示CDC25B过表达可能与食管癌的发生有关;CDC25B表达与分化程度、浸润程度有关,与淋巴结转移无关,提示CDC25B可能只在食管癌的早期发挥作用,但并不参与食管癌的转移。3 TGF-beta在食管鳞状细胞癌中的表达高于非典型增生组织和正常食管粘膜,提示TGF-beta过表达可能与食管癌的发生有关,TGF-beta过表达与淋巴结转移相关,提示其可能促进食管癌的转移。4在食管癌组织中,CDC25A、CDC25B表达不相关,CDC25A蛋白与Smad3蛋白表达呈负相关,CDC25B与Smad3蛋白表达不相关,提示CDC25A、CDC25B存在不同的调节机制,且在食管癌的发生发展中可能无协同作用。5 Smad3蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达低于正常粘膜,且与CDC25A蛋白表达呈负相关,提示食管鳞癌中Smad3蛋白表达的下调可能减弱了泛素-蛋白酶体对CDC25A蛋白的降解作用,进而导致了CDC25A蛋白含量升高。6食管癌组织中核内CDC25A蛋白可能有促增殖作用。7 Art可显著抑制裸鼠移植瘤的生长,且无明显的毒副作用,抑制CDC25A是Art发挥抑瘤作用的重要机制。