【摘 要】
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动物血资源含有丰富的营养物质,其中过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和凝血酶在食品、临床、工业等方面具有重要的应用价值。因此,对猪血的综合利用,不仅能创造可观的经济价值,更是解
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动物血资源含有丰富的营养物质,其中过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和凝血酶在食品、临床、工业等方面具有重要的应用价值。因此,对猪血的综合利用,不仅能创造可观的经济价值,更是解决了其对环境污染的问题,使猪血化废为宝。
建立了过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和凝血酶的联产工艺。通过DEAE-FF阴离子柱、CM-52阳离子柱和G-100分子筛,过氧化氢酶纯化至电泳一条带,纯化倍数24.2,回收率47.7﹪,比活达18486.3U/mgpro。通过DEAE-FF阴离子柱、热变性和超滤,超氧化物歧化酶得到初步纯化,纯化倍数57.6,回收率75.7﹪,比活为3536.3U/mgprotein。
改进了肾上腺素SOD测活法,选用325nm波长提高灵敏度,并研究各因素对测活的影响,结果表明随着底物浓度、pH及温度的增加,自氧化速率相应增加。用改进后的方法测活,平均回收率93.32﹪,批内变异系数7.71﹪,最大抑制率70.30﹪,准确度、重复性及灵敏度均高于原始方法。此外,比较了微量连苯三酚法和改进后的肾上腺素法,得出连苯三酚在重现性和灵敏度方面高于肾上腺素法,前者与后者测活结果的比值约为2.21。
从微生物尤其是微球菌中能获得高产量的过氧化氢酶。优化了藤黄微球菌的培养条件,比较了藤黄微球菌与猪血来源的过氧化氢酶的回收率,前者与后者回收率比值为3.2。对两种来源过氧化氢酶进行了部分性质比较,研究了pH和温度对酶活的影响、酶的pH稳定性和热稳定性、酶的动力学参数、金属离子及化合物对酶活的影响、酶的时间及冻融稳定性。
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