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目的从方证对应的角度,以柴胡疏肝散为干预手段,从ERK1/2-CREB-BDNF信号通路探讨围绝经期肝郁证的生物学基础。方法1.48只2月龄SPF级雌性SD大鼠,适应性喂养1个月后,按体质量分层随机分为假手术组、围绝组、围绝肝郁组和柴胡疏肝散组。假手术组摘除卵巢旁脂肪组织,其余各组行去势手术,采用苏木素-伊红染色（Hematoxylin-eosin Staining,HE）观察大鼠阴道脱落细胞涂片,判断围绝经期动物模型建立是否成功。围绝肝郁组和柴胡疏肝散组采用慢性不可预知性温和应激（Chronic Unpredictable Mild Stress,CUMS）建立肝郁证模型。2.药物干预,自CUMS第1天起,柴胡疏肝散组大鼠灌胃柴胡疏肝散水煎剂(3.31g·kg-1·d-1),假手术组、围绝组和围绝肝郁组大鼠则灌胃等体积的生理盐水,每天1次,连续干预21天。3.观察大鼠体质量、强迫游泳不动时间、蔗糖水偏好率。4.酶联免疫吸附测定法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA）检测大鼠血清中雌二醇（Estradiol,E2）、促肾上腺皮质激素（Adreno-cortico-tropic-hormone,ACTH）、皮质酮（Corticosterone,CORT）、5-羟色胺（5-hydroxytryptamine,5-HT）、多巴胺（Dopamine,DA）、去甲肾上腺素（Norepinephrine,NE）含量。5.实时荧光定量PCR（Real-time Quantitative PCR,q-PCR）检测大鼠海马、下丘脑中细胞外信号调节激酶1/2（Extracellular Signal-regulated Kinase1/2,ERK1/2）、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（Cyclic-AMP Response Element Binding Protein,CREB）、脑源性神经营养因子（Brain-derived Neurotrophic Factor,BDNF）及酪氨酸蛋白激酶B（Tropomyosin Receptor Kinase B,TrkB）mRNA表达量。6.蛋白免疫印迹法（Western Blot,WB）检测大鼠海马ERK1/2、CREB、BDNF和TrkB蛋白表达量。7.7.0 T小动物功能性核磁共振成像采集各组大鼠脑部影像学数据,通过局部一致性（Regional Homogeneity,ReHo）分析各组大鼠脑区神经元活动变化。结果1.去势后大鼠阴道脱落细胞涂片提示动情周期紊乱,围绝经期动物模型建立成功。围绝组比假手术组,大鼠体质量增高（P<0.05）,体质量增长率明显升高（P<0.01）,围绝肝郁组比围绝组,大鼠体质量降低（P<0.05）,体质量增长率降低明显（P<0.01）,柴胡疏肝散组体质量较围绝肝郁组减轻（P<0.05）。2.造模前各组大鼠强迫游泳不动时间、蔗糖水偏好率均无明显差异（P>0.05）。干预后,围绝肝郁组比假手术组,强迫游泳不动时间延长（P<0.05）,蔗糖水偏好率明显降低（P<0.01）;围绝肝郁组蔗糖水偏好率与围绝组相比明显降低（P<0.01）;柴胡疏肝散组比围绝肝郁组,强迫游泳不动时间缩短（P<0.01）,蔗糖水偏好率显著升高（P<0.01）。3.血清E2含量,与假手术组比,各组均显著降低。血清ACTH、CORT含量,围绝肝郁组比假手术组、围绝组均显著升高,柴胡疏肝散组比围绝肝郁组明显降低。血清5-HT、DA、NE含量,围绝肝郁组比假手术组、围绝组均显著降低,柴胡疏肝散组比围绝肝郁组明显升高（P<0.01）。4.海马ERK1/2、CREB、BDNF、TrkB mRNA表达量。与假手术组比,围绝肝郁组海马ERK1/2、BDNF、TrkB mRNA表达量降低（P<0.05）,而CREB mRNA表达量降低趋势,差异无统计学意义。与围绝组比,围绝肝郁组海马ERK1/2、CREB、BDNF表达量均降低（P<0.05;P<0.01）,TrkB mRNA表达量有降低趋势,差异无统计学意义;与围绝肝郁组比,柴胡疏肝散组海马ERK1/2、CREB、BDNF、TrkB mRNA表达量均显著升高（P<0.01）。下丘脑ERK1/2、CREB、BDNF、TrkB mRNA表达量。围绝肝郁组下丘脑ERK1/2、CREB、BDNF、TrkB mRNA表达量与围绝组、假手术组相比均表达下降（P<0.05;P<0.01）;与围绝肝郁组比,柴胡疏肝散组下丘脑ERK1/2、CREB、BDNF、TrkB mRNA表达量均显著升高（P<0.01）。5.海马ERK1/2、CREB、BDNF、TrkB蛋白表达量。ERK1/2蛋白各组有变化趋势,差异无统计学意义。与假手术组比,围绝肝郁组BDNF、TrkB蛋白表达量降低（P<0.05）,CREB蛋白表达量有降低趋势,差异无统计学意义;与围绝组比,围绝肝郁组海马CREB蛋白表达量下降（P<0.05）;与围绝肝郁组比,柴胡疏肝散组海马CREB、BDNF、TrkB蛋白表达量均升高（P<0.05;P<0.01）。6.围绝组与假手术组相比,静息态ReHo值分析结果显示在大鼠左侧海马、左侧纹状体、运动皮层、视觉皮层等脑区局部一致性出现了降低;围绝肝郁组比围绝组,左侧海马、杏仁核、运动皮层等脑区局部一致性出现了升高;围绝肝郁组与假手术组相比,小脑后叶、左侧梨状皮层、左侧纹状体等脑区局部一致性出现了降低。柴胡疏肝散作用后,小脑后叶、海马、纹状体、嗅觉皮层、感觉皮层等脑区局部一致性出现升高。结论1.围绝经期肝郁证存在神经递质5-HT、DA、NE紊乱。2.围绝经期肝郁证能引起ERK1/2-CREB-BDNF信号通路异常,柴胡疏肝散可以通过调节ERK1/2-CREB-BDNF信号通路的表达,调控行为学变化,改善大鼠抑郁状态,发挥抗抑郁作用。3.围绝经期肝郁证的病理变化可能涉及小脑后叶、纹状体、海马等区域静息态功能异常,柴胡疏肝散可能通过调节“皮层-海马-纹状体-小脑后叶”神经网络自发性活动发挥抗抑郁作用。