【研究背景】 阴茎再造术是整形外科领域极具挑战性的手术之一，主要应用于各种原因导致的阴茎缺如、缺损、发育不全或性别畸形，以及女性易性病患者。自1936年Bagoras首创腹部皮管转移法行阴茎再造获得成功以来，手术方法经过不断改进完善，阴茎外形及尿道重建的形态效果较为满意。但阴茎再造后的感觉功能缺失一直是困挠临床治疗的难题，尤其是本体感觉的恢复远未达到理想的要求，严重影响术后性生活的质量，给患者身心带来了极大痛苦，而良好的皮肤感觉及对性冲动的感知是阴茎再造受术者非常在意的要求，而且保护性感觉也是阴茎支撑体植入的必要条件。因此，再造阴茎感觉功能的重建或恢复对于阴茎再造手术方式本身的改进以及增强患者自信心，乃至维系家庭和社会的稳定都具有重要意义。而目前有关这一方面的研究尚少见报道。 【目的】 本研究旨在探求再造阴茎感觉功能重建的新的有效方法及其可行性，为临床应用提供理论依据和实验基础。以健康成年家兔为实验对象，首先明确家兔阴茎感觉神经躯体纤维投射来源及其节段性分布规律，进而构建游离隐神经移植与阴茎背神经端端吻接植入腹壁浅血管筋膜蒂岛状皮瓣再造阴茎的动物模型，探索在阴茎再造术中应用自体感觉神经游离移植与阴茎背神经吻接重建再造阴茎感觉功能的新方法；然后对植入神经再生状况进行形态学研究和再生神经的HRP逆行示踪检测，以评估判断其结构和功能的恢复情况，并进一步从基因水平探讨再造阴茎感觉功能重建对脊髓背根节(dorsal root ganglia，DRG)内胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor，GDNF)表达的影响及其意义。 【方法】 ① 采用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)逆行神经示踪技术，选择健康成年雄性新西兰家兔8只，戊巴比妥钠麻醉动物后，用微量注射器将50％HRP分别多点注射于家兔阴茎皮下和阴茎背神经近侧断端，留针时间30分钟，动物存活5天后，4％多聚甲醛心脏灌注取材，取出腰骶段脊髓及相应DRG，30μm连续冰冻切片，DAB显色，明视野和暗视野显微镜下分别镜检，在MIAS细胞图第二军医大学中文摘要硕士学位论文像分析仪下扫描分析，并计算DRG内阳性神经元的数量，对家兔阴茎感觉神经躯体纤维投射来源的节段分布进行观察。 ②采用游离隐神经移植与阴茎背神经外膜端端吻合，植入以腹壁浅血管筋膜蒂岛状皮瓣再造的阴茎，构建再造阴茎感觉功能重建的动物模型，术后不同时期对其成活情况进行大体动态观察。 ③健康成年新西兰雄兔40只随机均分为实验组和对照组，每组每一时间段各4只。采用腹壁浅血管筋膜蒂岛状皮瓣行阴茎再造术，实验组切取一段隐神经游离移植，与阴茎背神经外膜端端吻合植入皮瓣后阴茎成形，对照组再造阴茎内未植入神经。术后1周、2周、1个月、3个月、6个月，利用H即逆行神经示踪技术判断隐神经移植体植入皮瓣与阴茎背神经吻合后再生神经轴浆流运输功能的恢复情况，应用HE染色、免疫组化(EnVisioll法)、浸银染色(Sevier Munger改良银染法)、细胞图像分析仪、LSCM及电镜等方法对再造阴茎内感觉神经纤维及感觉小体的再生情况进行形态学观察。 ④分别于术后1周、2周、1个月、3个月灌注取材S:节段背根节，用RT一CR法检测不同时间背根节感觉神经元内GDNF mRNA的表达变化。【结果】 ①逆行神经示踪结果显示，52一S;节段脊神经节内出现大量HRP阳性标记感觉神经元细胞，以S:和53为多，呈明显节段性分布，各节段阳性神经元计数分别为:52(2一5.0士10.2)，53(242.2士8.3)，S;(109.7士8.4)，细句差别具有统计学显著性意义(尸<0.01)。 ②成功构建了游离隐神经移植与阴茎背神经端端吻合植入腹壁浅血管筋膜蒂岛状皮瓣阴茎再造术的动物模型，再造阴茎全部成活，大体形态满意，皮瓣血液循环良好，皮肤毛发生长良好。供区一期愈合，下肢活动无明显障碍。两组再造阴茎外观长度、粗细比较无显著差别。 ③HRP逆行追踪结果显示:术后1个月实验组移植神经侧DRG内开始出现阳性细胞，随着时间延长，阳性细胞数逐渐增多，而对照组DRG内至术后6个时刁‘偶见散在数个阳性细胞;HE染色可见实验组皮瓣内神经束数量不断增多，至术后6个月时尚可见神经长入脂肪层，对照组皮瓣内残存固有神经呈萎缩改变;感觉小体银染、CGRP免疫组化、CGRP免疫荧光染色以及LSCM扫描结果均显示:第二军医大学中文摘要硕士学位论文术后1个月实验组神经植入后再生感觉神经纤维、触觉小体、表皮内游离神经末梢的密度和数量明显高于对照组，3个月后两组间反差更趋明显;电镜结果表明:实验组神经植入术后3个月以内，皮肤感觉神经的再生以无髓神经纤维为主，之后有髓纤维和无髓纤维均有出现。 ④GDNF mRNA在正常背根节感觉神经元内存在少量表达;感觉重建早期背根节内GDNF mRNA的表达显著增强，1个月时轻度下调，至术后3个月恢复正常水平。【结论】 ①家兔阴茎感觉神经躯体纤维投射主要来源于52一S;节段背根节，并呈明显节段性分布。 ②游离隐神经移植与阴茎背神经端端吻合植入腹壁浅血管筋膜