菊花是临床上较常用的一种中药饮片,其具有药食两用的特点。《中国药典》2010年版收载了对菊花药材的定性鉴别和指标成分的含量测定内容,但是仍有不足之处,就目前市场上菊花的品种而言,其分类较为混乱,从而使得菊花的基原判定较为困难。本文以菊花药材及饮片为研究对象,以2010年版《中国药典》为基础,进行了以下系列的研究,以完善和提高其质量标准的控制水平。1.薄层色谱鉴别研究创新性采用C18反相薄层色谱对5种市售菊花饮片中的化学成分进行了鉴别研究,并且与《中国药典》2010年版中收录的4种药用菊花的正相薄层色谱的鉴别效果相比,C18反相薄层色谱所反映的信息既保留了原有的鉴别成分,又增加了许多新的信息,并能在一定程度上体现出品种差异,且反相薄层色谱检测具有高效、快速、展开剂配比简单、毒性小的特点。对C18反相薄层色谱的探索研究,将为中药饮片定性鉴别及质量控制提供新的研究方向。2.指纹图谱研究利用高效液相色谱法建立了5种市售菊花饮片各自的指纹图谱,在滁菊的对照指纹图谱中标定了23个共有峰,在亳菊的对照指纹图谱中标定了20个共有峰,在贡菊的对照指纹图谱中标定了14个共有峰,在杭菊的对照指纹图谱中标定了22个共有峰,在祁菊的对照指纹图谱中标定了22个共有峰。最后采用中药指纹图谱相似度评价软件进一步对这5种菊花各自的对照指纹图谱进行Mark峰匹配,再次形成的对照指纹图谱即为综合了贡菊、杭菊、滁菊、亳菊及祁菊5种菊花特征的菊花特征图谱,并确立了菊花特征图谱中的12个特征峰。采用高效液相色谱与质谱联用技术,对菊花对照药材中的特征色谱峰进行了指认。3.含量测定研究同时建立了五种市售菊花饮片中绿原酸、木犀草苷、3,5-O-二咖啡酰基奎宁酸、木犀草素、山柰酚、金合欢素的含量测定方法；所建立的含量测定方法精密度、稳定性、重复性、准确度均良好,可作为这5种市售菊花饮片中上述6种成分的质量控制方法。4.菊花基原判别方法的研究在指纹图谱和含量测定研究的基础上,将本实验所收集到的所有批次的菊花进行主成分分析,利用SPSS16.0进行主成分因子分析以简化数据信息,同时获得三个主成分使累计方差贡献率达95.882%。将这三个主成分导入SIMCA-P数据分析软件以菊花品种作为分类标签,进行聚类处理,该聚类结果与经验鉴别的结果相符率均在80%以上,最终确定决定菊花品种差异的主要特征成分组为木犀草苷与木犀草素,在限制采收时间的前提下,二者含量的比值范围可以作为菊花基原判定的评价依据。5.水煎与醇提取物内在差异研究由于传统中药的使用及中成药生产多采用水煎法进行提取,其煎出物的化学成分与用有机溶剂提取所得的化学成分存在一定的差异。本文对5种菊花饮片的水煎出物与醇提取物进行了对比研究,研究结果表明：菊花饮片在水煮后,总体而言醇提液成分含量高于水煎液；在本实验所测定的6种成分中,绿原酸、3,5-0-二咖啡酰基奎宁酸的含量在水煎液中较醇提液稍高,贡菊和滁菊除外。而一些极性较小的黄酮苷元类化合物如：木犀草素、山柰酚、金合欢素在水煎液中含量明显不如醇提液,该结论可以为临床水煎剂的使用、中成药的生产加工工艺研究以及中药的药理毒理研究提供参考。代代花作为一种行气宽胸、开胃止呕的中药,虽未被《中国药典》收录,但由于其疗效明显、毒副作用小,一直是中国民间常用的药食两用的理气佳品。以往国内外的相关研究表明,柑橘属黄酮类化合物具抗氧化、抗菌、抗病毒、抗炎以及抗癌活性,对预防动脉粥样硬化与胆固醇增加等均有一定的干预疗效。代代亦归属于柑橘属,其植物中亦含有较为丰富的黄酮类成分,目前,关于代代花中黄酮类成分的研究尚不多见,为进一步明确代代花中黄酮类成分的类型及其各自的药理活性,首先需要采取适当的方法对代代花中黄酮类成分进行富集并纯化。本研究目的即在于探索如何更高效且便捷地从代代花中富集总黄酮并对其进行纯化。1代代花总黄酮提取方法的研究通过前期的预实验对比,综合考虑提取成本及提取效率等因素,最终采用水提取醇沉法作为代代花药材中总黄酮成分的提取方法,选用L9(34)正交试验表,通过正交试验,对水提取法进行工艺优化,将水提取时的药材与溶剂的料液比、提取时间、提取次数设为正交试验主要因素,根据生产经验确定各因素项下适当的几个水平,以提取物中总黄酮百分含量以及转移率为指标,按正交试验结果优化组合,从而确立了最终的水提取方法为：16倍量水,加热回流提取3次,每次2.5小时；在此基础上采用U6*(64)均匀设计表,以均匀试验对醇沉法的工艺进行优化,将醇沉前浸膏的相对密度以及醇沉后乙醇的最终浓度设为主要因素,据经验设定各因素项下适当的几个水平,同样以总黄酮百分含量及转移率为指标,依据均匀试验结果,以直观分析的方式,确定醇沉法工艺为：醇沉前浸膏的相对密度1.17 mg·mL-1,搅拌加入乙醇使醇沉后乙醇最终浓度达85%,并于室温静置24小时,即可得代代花总黄酮粗提物。2代代花总黄酮的测定方法研究主要对比了紫外分光光度法(UV法)与高效液相色谱法(HPLC法)对代代花中总黄酮的测定结果,其中UV法中还比较了使用不同显色剂(A1C13及NaNO2-Al(NO3)3-NaOH系统)时的总黄酮测定结果的差异,以HPLC法的测定结果为标准参照,鉴于最终UV法所测定的结果与HPLC法所测定的结果差距较大,为保证实验的准确性,最终代代花中总黄酮的测定方法采用的是HPLC法。3代代花总黄酮的纯化工艺的研究考虑到大孔树脂是较为常用的分离纯化天然产物的高分子聚合物,纯化效果好,能充分保证转移率,同时大多数的大孔树脂材料价格适中,因此本实验选用大孔树脂为主要的总黄酮纯化材料。实验初期人为筛选出5种极性不同的大孔树脂,通过静态吸附法,以吸附率及吸附-解析率为评价指标,最终优选吸附率及吸附-解吸率均较大,且价格适宜的AB-8型大孔树脂为最佳填料。将优选出的大孔树脂填料以动态上样的方式,确定动态最大上样量、水洗除杂体积、醇洗体积,并以此为基础将上样浓度、上样流速、醇洗脱浓度、醇洗脱流速进行单因素优化,最终择优组合,确立代代花中总黄酮的纯化工艺为：在树脂最大载样量54.89 mg·g-1的前提下,总黄酮待纯化水液的上样浓度为10 mg·mL-1,上样流速为4 BV.h-1,水洗体积为15 BV,醇洗脱体积为5 BV,分20%及40%两个乙醇浓度进行梯度洗脱,乙醇洗流速为6 BV.h-1,收集20%浓度部位的后半部分及40%浓度部位的所有洗脱流份,蒸干,即可得百分含量达60%的总黄酮精提物。