猪繁殖与呼吸障碍综合征是在全世界范围内引起养猪业巨大经济损失的疾病,该病毒感染会引起猪严重的繁殖障碍、呼吸道疾病以及生长迟缓等症状。PRRSV首次发现于20世纪80年代中后期的美国,目前该病已在欧洲、北美洲以及东南亚范围内广泛传播,并呈现全球蔓延趋势。1996年,我国首次从感染猪体内分离出PRRSV。近年来,针对PRRSV的防治主要是疫苗治疗,如灭活苗、弱毒苗、DNA疫苗、活载体疫苗等,疫苗防治有其自身优势,但是也存在一定的局限性,如:免疫失败、弱毒苗毒力返强、免疫原性较低等。因此,寻找有效的抗病毒药物成为目前PRRSV的研究热点。中医中药在防治病毒感染性疾病方面具有重要作用。中药蕴含结构丰富、活性多样的天然化合物,是寻找有效抗病毒药物的“宝库”。甘草酸、柴胡皂苷等多种中药单体被已证实具有广泛的抗病毒活性。有关抗PRRSV的中药筛选及其药效成分研究报道较少。我们发现青蒿琥酯、苦豆碱、广藿香酮在Marc-145细胞中具有显著的抗PRRSV活性,本文对三种化合物体外抗PRRSV活性进行系统的评价,对其作用机制进行初步探究。本论文首先在Marc-145细胞上建立了体外PRRSV的感染模型,基于此模型我们通过间接免疫荧光的方法从80余种天然中药单体中筛选出近10种有效抗PRRSV的活性化合物,包括青蒿琥酯、苦豆碱和广藿香酮。我们通过MTT试验确定了三种药物的细胞毒性,又通过qPCR的方法检测了药物对PRRSV NSP-9 mRNA表达量的抑制作用,以及通过Western Blot试验检测三种药物对PRRSV N蛋白表达的抑制。试验结果表明,在PRRSV感染48h,青蒿琥酯在0.6μg/mL~2.5μg/mL、苦豆碱在10μg/mL~40μg/mL、广藿香酮在3μg/mL~12μg/mL范围内可有效抑制PRRSV在细胞内的增殖,并呈现明显的剂量依赖关系。在药物预处理细胞的作用模式中,三种药物均不能保护细胞抵抗PRRSV感染。在药物直接灭活病毒作用模式中,青蒿琥酯在0.6μg/mL~2.5μg/mL,苦豆碱在20μg/mL~40μg/mL范围内均可直接灭活病毒,而广藿香酮没有直接灭活病毒的作用。在PRRSV复制周期不同阶段的试验中发现,三种药物在PRRSV吸附和内化阶段均可以发挥抑制作用;但只有广藿香酮可以抑制子代病毒的复制,而苦豆碱对子代病毒释放具有显著抑制作用。综上可看出,青蒿琥酯、苦豆碱、广藿香酮均具有良好的抗PRRSV活性,其作用环节及其机制不完全相同。本研究首次发现青蒿琥酯、苦豆碱、广藿香酮具有显著的体外抗PRRSV活性,并对病毒复制的多个阶段具有抑制作用。青蒿琥酯是医学临床上已广泛应用的抗疟疾药物,苦豆碱和广藿香酮分别是临床常用中药苦豆子和广藿香的主要活性成分,三种药物生物安全性高。本论文测定结果为后续三种药物的体内抗PRRSV药效研究及其开发提供了试验依据。