肉豆蔻酸对猪肌内脂肪前体细胞分化聚酯的影响

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肉豆蔻酸是一种14碳饱和脂肪酸。以往的研究表明,肉豆蔻酸对机体的脂肪代谢具有影响,但迄今有关肉豆蔻酸对脂肪前体细胞的分化聚酯是否具有调节作用尚未见报道。为研究肉豆蔻酸对猪肌内脂肪前体细胞分化聚酯的影响,本试验选用5-7日龄长白仔猪,采用胶原酶消化法,从背最长肌分离并纯化肌内脂肪前体细胞,并在分化培养基中添加不同浓度(0μM、10μM、50μM、100μM)的肉豆蔻酸,诱导脂肪细胞分化。在不同分化时间点(24h、72h、120h)观察细胞形态,采用酶氧化法检测胞内甘油三酯含量和上清中合成甘油三酯的底物(葡萄糖、游离脂肪酸、甘油及甘油三酯)摄取量,采用内标法检测胞内脂肪酸组成,并采用荧光定量PCR和Western Blot检测细胞糖脂代谢相关基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平。  研究结果如下:  1、油红O染色和细胞内甘油三酯含量测定结果表明:不同浓度的肉豆蔻酸均能显著促进猪肌内脂肪前体细胞分化聚酯;其中高剂量组(100μM)的促进作用最强,并随着诱导天数的增加呈现出“先增加后降低”之趋势。中、低浓度的肉豆蔻酸对猪肌内脂肪前体细胞分化聚酯促进作用则呈现一定的时间和剂量依赖效应。  2、与对照组相比,培养基中添加肉豆蔻酸对胞外葡萄糖的吸收无影响,但能不同程度地促进细胞吸收游离脂肪酸和甘油,并抑制其向胞外释放,而甘油三酯的摄取则相反。  3、细胞中脂肪酸组成测定结果表明:添加肉豆蔻酸不仅能显著升高十四碳脂肪酸的绝对含量及十四碳、十八碳脂肪酸的相对含量,还能显著升高饱和脂肪酸的绝对含量及饱和与单不饱和脂肪酸的相对含量,但对其它脂肪酸的含量无影响。  4、实时荧光定量PCR检测结果显示:肉豆蔻酸能不同程度地促进葡萄糖代谢相关基因(GLUT1、PDK4)、脂肪酸转运相关基因(FAT、aP2、LPL)、脂肪酸合成相关基因(ACC、FASN)、脂肪分解相关基因(HSL、ATGL)、分化转录调控因子(PPARγ)的表达。  5、Western Blot检测结果表明:肉豆蔻酸能不同程度的促进脂肪酸转运相关蛋白(FAT、aP2)、脂肪酸合成相关蛋白(FASN)、脂肪分解相关蛋白(HSL、ATGL)及脂肪分化标志性蛋白(Perilipin)的表达;但对糖代谢相关蛋白PDK4的表达却起抑制作用。  综上所述,肉豆蔻酸可能通过促进猪肌内脂肪前体细胞糖脂代谢相关基因的表达,进而促进细胞的分化聚酯,并改变细胞的脂肪酸组成。  
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