基于CeO2/MXene异质结和Dual-Toehold介导的链置换反应检测BCR-ABL融合基因新方法的研究

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慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia,CML)是一种常见于50岁以上人群的血液系统恶性肿瘤,而在受累的骨髓细胞中往往可以检测到BCR-ABL融合基因的存在,因此BCR-ABL融合基因可辅助诊断CML,与CML的发生高度相关。如今常用的检测方法包括但不仅限于荧光原位杂交(FISH)、聚合酶链式反应(PCR)、Western Blot印迹法、流式微球阵列(CBA)等,然而这些方法存在着设备昂贵、操作复杂和灵敏度低等缺陷。因此,我们迫切需要发展出一种低成本、易操作且高度灵敏的检测新方法。基于Ce O2/MXene异质结和构型熵驱动的双立足点链置换反应(DT-SDA)信号放大策略,构建了一种用于BCR-ABL融合基因检测的“on-off”型无酶超灵敏电化学发光(ECL)生物传感器。Ce O2/MXene异质结通过一步水热法在Ti3C2-MXene纳米片表面原位还原Ce O2纳米立方体制备而成。制备的Ce O2/MXene异质结具有良好的分散性和导电性,不仅显著增强了S2O82-/O2体系中的ECL信号,而且还可以作为良好的电极修饰材料,为三链复合物ST/AS/BK的固载提供了大量的位点。在靶物质BCR-ABL融合基因和Bio-FS存在的情况下,靶物质与ST末端暴露的双立足点结合,置换出AS和BK,进而获得部分互补的ST/靶物质复合体。随后,Bio-FS结合到ST/靶物质复合体中位于ST链的未杂交部位(作为新立足点)以形成ST/Bio-FS,置换出靶物质,进而触发新的SDA循环。这种构型熵驱动的DT-SDA使三链ST/AS/BK复合物在电极界面转变为双链ST/Bio-FS。最终,通过生物素-链霉亲和素的特异性识别,引入链霉亲和素修饰的铂纳米颗粒功能化聚多巴胺复合物(SA-Pt@DPA)的淬灭探针,利用对Pt@DPA对S2O82-/O2体系的ECL信号淬灭,实现BCR-ABL融合基因的高灵敏检测。研制的ECL生物传感器提供了一种简便、无酶的方法用于BCR-ABL融合基因的检测,检测线性范围从1 f M到100 p M,检测下限为0.27 f M,在白血病分子诊断中具有潜在的临床应用前景。
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