赫赛汀对人乳腺癌细胞株MDA-MB453化疗增敏作用的研究

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【目的】探讨赫赛汀(HER)对化疗药泰索帝(TXT)、盖诺(NVB)、顺铂(DDP)、阿霉素(ADM)、健择(GEM)、依托泊甙(VP-16)增敏的规律及其机制,为临床赫赛汀联合化疗药物联合使用提供实验依据。【方法】应用免疫细胞化学方法选择HER-2高表达的细胞系进行实验研究;应用四氮唑蓝(MTT)快速比色法测定赫赛汀组、单药化疗组以及以不同序贯方式结合的赫赛汀联合化疗组对人乳腺癌细胞株(MDA-MB453)的生长抑制率;流式细胞仪各组细胞周期的变化。【结果】1、免疫细胞化学方法检测MDA-MB453 HER-2蛋白表达为(3+)2、化疗药物HER、TXT、NVB、DDP、ADM、GEM、VP-16均对体外MDA-MB453细胞有直接的抑制和杀伤作用(P<0.001);3、MTT检查发现:(1)使用HER18h后应用TXT组取得最高的抑制率,明显高于其他序贯组及单药TXT组(P<0.05),发挥协同作用;(2)使用NVB后40h应用HER组的抑制率高于单药NVB组(P<0.01),此时抑制率最高,发挥协同作用;使用NVB组10h后应用HER组抑制率低于单药NVB组(P<0.05),此时拮抗作用最强;(3)HER与DDP联用时抑制率均好于单药DDP(P<0.01),各组均为相加作用,其中以同时作用时效果最好;(4)各序贯ADM+HER联合作用组抑制率好于单药ADM组,表现为相加或协同作用;其中使用ADM后12~24h组协同作用较强:(5)使用HER后应用GEM组及HER+GEM同时应用组抑制率高于单药(P<0.01);使用GEM后应用HER组抑制率明显低于单药GEM组;同时使用时表现为相加作用,其他组则为拮抗作用(6)使用HER后应用VP16组、HER+VP16同时应用组及使用VP16 24h后应用HER组抑制率高于单药(P<0.01),同时应用组及化疗前应用HER组表现为相加作用,以化疗前6h应用最好。6、细胞周期分析发现:(1)单药HER引起细胞周期G1期阻滞,S期减少;(2)单独TXT使细胞周期阻滞于G2/M期;与单药TXT化疗组相比,使用HER18h后应用TXT组G0/G1期细胞所占比例增加,G2/M期细胞减少,而使用TXT6h后应用HER组则S期细胞所占比例明显增加,G2/M期细胞明显减少;(3)单独NVB将细胞周期阻滞于G2/M期;与单药化疗组相比,使用NVB 10h后应用HER组G0/G1期细胞所占比例减少,S、G2/M期细胞增多;而其他序贯组则相反;(4)单独DDP使细胞周期阻滞于G2/M期;与单药DDP组相比,先使用HER后应用DDP组G0/G1、S期期细胞所占比例减少,G2/M期细胞增多,而其他组则未见明显变化;(5)单药ADM使肿瘤细胞阻滞在G2/M期;使用ADM 24h后应用HER组较其他序贯方式组及单药ADM组,G0/G1、S期比例下降,G2/M期比例升高;随着赫赛汀与ADM序贯方式的改变,G0/G1、S期比例逐渐下降,G2/M期比例升逐渐升高;(6)单药GEM使肿瘤细胞阻滞在S、G2/M期;GEM+HER同时应用组S期阻滞增强;随着序贯方式的改变,G2/M期所占比例逐渐降低;(7)单药VP-16使细胞周期阻滞在S、G2/M期;先HER后VP-16组及VP-16+HER同时应用组S期比例增高,G2/M期比例下降;而使用VP-16 6h后应用HER组引起明显的G1期阻滞,S、G2/M期比例减少。【结论】赫赛汀同与不同化疗药物,以不同序贯方式使用可取得不同的生长抑制作用:与泰索帝联合时,提前18h应用HER可取得最佳抑制作用;与盖诺联合应用时,化疗后40h应用HER为最佳序贯方式;与顺铂联合应用时,先化疗后使用HER可取得最佳效果;与阿霉素联合应用时,化疗至少12h后应用HER时可取得最佳抑制作用;与健择联合应用时,同时应用HER为最佳序贯方式;与VP16联合应用时,提前6h应用HER为最佳序贯方式。其发生机制可能与细胞周期的变化有关。
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