内皮抑素基因转染子宫内膜异位症大鼠模型的基因与蛋白表达量分析

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目的:应用阳离子脂质体介导的内皮抑素(ES)重组质粒局部注射法将ES基因转染至子宫内膜异位症(EMs)大鼠模型,判断转染是否成功,以了解ES转基因技术应用于EMs治疗的可能,并为后期的疗效观察打下基础。 方法:85只14周龄健康雌性未孕Lewis大鼠采用自体子宫内膜移植法构建EMs模型,手术4周后(转染前)第二次开腹,通过肉眼大体观察判断建模成功与否。选择建模成功的64只大鼠作为实验研究对象,随机分为ES转染组(I组)24只、载体对照组(Ⅱ组)20只和阴性对照组(Ⅲ组)20只。ES转染组大鼠用10μl微量注射器一次性异位病灶内注射lipofectamine-endo-pBud复合物2μl进行ES基因转染,载体对照组大鼠同法注射载体脂质体lipofectamine-pBud复合物2μl,阴性对照组同法注射PBS 2μl进行对照。2周后(转染后)第三次开腹,每组大鼠各随机均分为两小组,即I组分为Ia组(12只)和11)组(12只),Ⅱ组分为Ⅱa组(10只)和Ⅱb组(10只),Ⅲ组分为Ⅲa组(10只)和Ⅲb组(10只)。取Ia、Ⅱa与Ⅲa 3小组异位病灶组织通过实时荧光定量PCR法检测ES基因的相对表达量,用Western-blot对ES蛋白的相对表达量进行测定,同时Ia组的异位病灶组织用Western-blot对ES-HA融合蛋白进行测定,均用来判断转染成功与否,用另外3小组Ib、Ⅱb与Ⅲb组的异位病灶组织固定、包埋、切片后通过HE染色病理组织学检查进一步确认建模的成功。 结果: 1.自体子宫内膜移植法构建Lewis大鼠子宫内膜异位症模型,术后4周85只大鼠中有64只见移植物体积增大,内部有液体积聚,表面有血管形成,呈隆起透亮的小囊状,质软,病理组织学检查见囊内壁有子宫内膜腺体组织及间质细胞生长,视为建模成功;成功率为75.29﹪;11只为异位病灶不生长萎缩变小,8只为炎性坏死囊肿,呈浑浊黄白色结节状,切开囊肿成黄色膏脂样物,2只死亡。 2.采用阳离子脂质体Lipofectamine2000介导的重组质粒endo-pBud病灶内直接注射的方法进行大鼠内皮抑素基因转染,注射相应试剂后2周实时荧光定量PCR法检测到转染组异位病灶组织中ES基因的表达高于载体对照组和阴性对照组(P<0.05),而载体对照组与阴性对照组之间比较无统计学差异(P>0.05);Western-blot的结果示ES转染组异位病灶组织有.ES-HA.融合蛋白表达,且ES蛋白的相对表达量ES转染组显著高于载体对照组和阴性对照组(P<0.01),而载体对照组与阴性对照组之间比较无统计学差异(P>0.05)。结论: 1.自体子宫内膜移植法建立Lewis大鼠子宫内膜异位症模型具有可行性和可重复性,是较理想的动物模型。 2.阳离子脂质体Lipofectamine2000介导的重组质粒endo-pBud病灶内直接注射法可以成功实现ES在子宫内膜异位症大鼠异位内膜中的表达。
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