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[目的]分析雌激素对雌激素受体阴性乳腺癌的影响,阐述微环境因素在雌激素促进雌激素受体阴性乳腺癌发生发展中的作用机制。[方法]1.构建去势Balb/C小鼠动物模型,皮下种植同源的雌激素受体阴性的乳腺癌细胞。2.比较外源性注射雌激素组和对照组的肿瘤形成情况,以及癌相关成纤维细胞有关的细胞因子在这两组中的表达差异,找出导致两组成瘤差异的因素。3.利用组织免疫荧光分析CAF的特异性标记物和SDF-1α的共定位情况,分析SDF-1α是否来源于CAF。从临床样本入手,利用差速贴壁法提纯临床乳腺癌样本中的CAF,细胞免疫化学法鉴定CAF,再利用CD326磁珠阳性筛选出肿瘤上皮细胞,然后ELISA分析雌激素作用下SDF-1α的主要来源。4.利用平板克隆技术探究雌激素组和对照组成瘤能力的差异是否是由SDF-1α引起的细胞增殖差异引起。流式细胞术比较分析两组肿瘤组织中MDSC的含量,以及使用Transwell小室分析外源性SDF-1α对骨髓来源的MDSC的趋化作用,同时比较分析对照组、CAF组、雌激素组和(雌激素+CAF)组对MDSC的趋化作用。5.在去势动物模型中,利用AMD3100抑制SDF-1α/CXCR4通路,利用吉西他滨去除MDSC,观察处理后组织中MDSC的募集情况以及对肿瘤形成能力的影响。[结果]1.雌激素能够促进雌激素受体阴性乳腺癌细胞4T1和EMT6的体内成瘤。2.去势的雌性荷瘤Balb/c小鼠,经雌激素持续干预后,移植瘤中多数CAF分泌的细胞因子表达量增高,其中SDF-1α在mRNA水平和蛋白水平增高明显。3.移植瘤中SDF-1α与CAF的标志性蛋白α-SMA定位相同,且从临床样本原代的肿瘤细胞及CAF来看,能够被雌激素刺激分泌SDF-1α的主要是CAF。4.SDF-1α本身并不增加雌激素受体阴性乳腺癌细胞4T1和EMT6的增值。雌激素能够增加移植瘤中的MDSC在CD45+细胞中的比例(对照组VS雌激素组分别为,4T1:(11.1±3.3)%VS(49.5±7.4)%和 EMT6:(9.7±1.8)%VS(39.6±8.3)%,且外源性的SDF-1α能够趋化骨髓来源的MDSC。当雌激素和CAF共同作用时,对MDSC的趋化作用较之单独的雌激素或CAF作用,其趋化效果明显增强。5.特异性抑制SDF-1α/CXCR4轴,能够减少MDSC在肿瘤中的募集,其中雌激素组 VS 雌激素+AMD3100 组分别为,4T1:(47.4±5.2)%VS(19.5±1.9)%和EMT6:(42.7±7.3)%VS(18.7±1.2)%,并能减弱雌激素对 4T1 或 EMT6 移植瘤的促瘤作用;同时,利用吉西他滨去除MDSC,在减少MDSC的募集后,其中雌激素组VS(雌激素+吉西他滨组)分别为,4T1:(47.4±5.2)%VS(22.0±3.4)%;EMT6:(42.7±7.3)%VS(21.7±3.1)%,也能抵消雌激素的这一促瘤作用。[结论]雌激素能够促进雌激素受体阴性的乳腺癌发生发展,其可能的机制是它可以通过刺激癌相关成纤维细胞分泌SDF-1α募集MDSC到肿瘤微环境来抑制肿瘤免疫和诱导免疫逃逸。[目的]比较缺氧和常氧条件下CAF对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响,探究CAF分泌的SDF-1α在乳腺癌转移中的作用机制[方法]1.提取原代CAF,利用免疫荧光技术鉴定纯度后,在Transwell小室中比较缺氧和常氧条件下CAF对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响。2.Elisa检测缺氧条件下,CAF产生SDF-1α的情况。同时利用重组的SDF-1α蛋白,Transwell试验观测它对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响;利用重组的SDF-1α蛋白干预乳腺癌细胞后,通过尾静脉注射,在裸鼠体内观察乳腺癌的肺转移情况。3.利用Wetsern blot检测重组SDF-1α对PI3K/AKT,MAPK/Erk信号通路的影响;利用Transwell小室分析特异性抑制剂抑制PI3K/AKT和MAPK/Erk通路后,乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的改变情况。[结果]1.缺氧与常氧条件相比,缺氧条件下CAF更能够促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭。2.缺氧能够促进原代CAF分泌SDF-1α;重组的SDF-1α作用于乳腺癌细胞,能够提升细胞的迁移和侵袭能力。特异性抑制剂抑制SDF-1α/CXCR4,能够减弱肿瘤细胞的迁移和侵袭能力;同时体内研究显示,重组SDF-1α干预过的乳腺癌细胞在裸鼠体内发生肺转移的可能性大。3.SDF-1α能够激活PI3K/AKT和MAPK/Erk通路,其呈时间依懒性;抑制剂AMD3100抑制SDF-1/CXCR4后,SDF-1α对AKT和Erk1/2通路的激活作用也减弱;LY294002和PD98059分别抑制PI3K/AKT和MAPK/Erk,能够逆转SDF-1α对乳腺癌细胞迁移和侵袭的影响。[结论]缺氧微环境能够促进癌相关成纤维细胞分泌SDF-1α,它能够通过PI3K/AKT和MAPK/Erk途径影响乳腺癌细胞的迁移和侵袭。