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特发性肺间质纤维化(IPF)是一种不可逆性的慢性进行疾病,甚至最终发展至呼吸衰竭的间质性肺疾病ILD,现无明确病因,大约生存期为2.5-3.5年,短于肺癌的平均生存期,且目前数据表明每年发病率呈逐年上升,但因其早期临床症状及体征隐匿性给诊断及治疗设置了障碍,根据其2016年中国肺间质纤维化治疗专家共识表明,除肺移植外,目前尚无有效靶向治疗药物,探索肺间质纤维化的机制也成为了现阶段迫切需要解决的难题。生物信息经过复制、转录和翻译形成蛋白质,蛋白质通过与其他形成共价结合,此过程我们称之为蛋白质翻译后修饰,随着基因组学的深入研究,蛋白质翻译后修饰被广泛研究,其主要包括糖基化修饰、磷酸化修饰和乙酰化修饰,因发现80%的蛋白质都是糖蛋白,糖基化修饰是通过糖基化转移酶的催化,把糖链连接到蛋白质的特定位点上,影响某些生物大分子的物理特性,调节信号传导,及通路中的受体激活,进而参与许多病理和生理过程,1.6核心岩藻糖基化(FUT8)是将鸟苷二磷酸岩藻糖(GDP-FUC)转移到最内层N-乙酰葡萄糖的第6个碳原子上形成糖苷键,是哺乳动物中唯一的关键酶,在正常组织中表达较少,以往研究发现在肾纤维化等病理过程中表达增加,因此我们猜测否其参与肺间质纤维化的过程。以往研究发现肺间质纤维化主要是肌成纤维细胞大量形成和细胞外基质的大量沉积,肺泡结构丧失,造成不可逆转的破坏,因此肌成纤维细胞的来源成为成为阻断肺间质纤维化的关键,近年来,上皮-间质转化(EMT)成为机制研究的热点,EMT是一种上皮细胞逐渐转变成肌成纤维细胞,α-SMA、E-caderin被认为是上皮-间质转分化标志物,α-SMA的表达是肌成纤维细胞的特征,负责组织重塑及纤维化,E-caderin是肺上皮细胞特征,其纤维化后逐渐转变为N-钙粘蛋白,EMT是一个多基因、多信号通路,以往药物研究中,大部分阻断单一通路来抑制EMT过程,效果欠佳,据文献报道,EMT的经典通路TGF、EGFR、WNT等多通路中的关键蛋白都是糖蛋白,且受FUT8的修饰,我们是否可以从抑制FUT8角度来干预EMT过程,影响肺间质纤维化的发生与发展。第一部分观察核心岩藻糖基化对肺间质纤维化的影响目的:抑制核心岩藻糖基化是否可以影响博来霉素诱导肺间质纤维化方法:实验分为对照组、FUT8sh RNA组、纤维化组、纤维化+FUT8sh RNA组,通过博来霉素腹腔注射小鼠体内来构建肺间质纤维化模型,通过免疫荧光来检测核心岩藻糖基化是否在其模型中的表达,测定腺病毒滴度,向小鼠尾静脉中注入腺病毒,使其沉默FUT8基因,并用western bolt法来检测其表达水平。用HE、MASSON来观察四组的大体病理变化,并进行病理分析,用免疫组化及western检测细胞外基质(胶原蛋白I及胶原蛋白III)的表达。结果:免疫荧光来检测LCA在BLM组表达明显增加,用Masson、HE染色来观察FUT8sh RNA+BLM组较BLM组肺泡间质细胞减少,肺间质变薄,肺纤维化程度减轻,用免疫组化和免疫沉淀法CollagenⅠ和CollagenⅢ在FUT8sh RNA+BLM组较BLM组表达明显减少。结论:肺间质纤维化中存在核心岩藻糖基化现象,通过抑制核心岩藻糖基化可以抑制肺间质纤维化。第二部分观察核心岩藻糖基化对EMT的影响目的:核心岩藻糖基化可以影响肺间质纤维化中的EMT过程方法:实验分对照组、FUT8sh RNA组、纤维化组、纤维化+FUT8sh RNA组,通过western和免疫荧光来检测四组α-SMA、E-caderin的表达变化,及α-SMA与LCA、E-caderin与LCA共荧光,观察核心岩藻糖基化是否可以影响EMT过程。结果:用免疫荧光检测纤维化+FUT8sh RNA组较纤维化组中a-SMA减弱,E-cadrein表达的表达增强,纤维化+FUT8sh RNA组较纤维化组随着LCA表达减弱,a-SMA的表达减弱。但随LCA表达减弱,E-cadrein的表达却增强。结论:抑制核心岩藻糖基化可以阻碍肺间质纤维化中的EMT过程。