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1．目的： 了解汕头地区铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药情况和耐药原因，并对铜绿假单胞菌所产VIM-2型获得性金属β-内酰胺酶（以下简称VIM-2酶）的编码基因进行序列分析，明确酶基因表型；构建表达载体pET-41b（+）与VIM-2酶编码基因的重组质粒，并在大肠埃希菌BL21（DE3）中进行原核表达；将已经成功表达的融合蛋白进行纯化后测定其等电点；测定多种β-内酰胺类抗生素对酶的稳定性以及酶动力学参数，并观察温度及pH等因素对酶活性的影响。 2．方法： 2．1 参照文献，设计合成IMP、VIM和SPM-1型获得性金属酶以及铜绿假单胞菌外膜蛋白OprD2的上下游引物，以煮裂法提取细菌总DNA作为模板，运用PCR技术筛选含获得性金属酶基因和OprD2基因的阳性菌株。 2．2 参照文献，设计合成VIM-2酶全长基因的上下游引物，以煮裂法提取标准菌株总DNA作为模板，PCR扩增VIM-2酶编码基因，将PCR产物与pUCm-T载体连接后测定VIM-2酶的核苷酸序列。 2．3 将VIM-2酶全长基因克隆至表达载体pET-41b（+），再转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中，以IPTG诱导其表达并纯化，并用SDS-PAGE电泳检测表达和纯化情况。 2．4 等电聚焦电泳测定重组蛋白等电点（pI）。 2．5 用分光光度法测定多种β-内酰胺类抗生素对VIM-2酶的稳定性，并测定VIM-2酶对多种β-内酰胺类抗生素的动力学参数，以及温度、pH、底物浓度和抑制剂（EDTA）等因素对酶活性的影响。 3．结果：