【摘 要】
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背景:捕猎是动物在进化过程中高度保留的一种行为,对于动物的生存和生长至关重要。早期研究表明,电刺激猫的腹侧被盖区(ventral tegmental area,VTA)可引发捕猎样攻击,但是其中具体的神经环路仍有待研究。神经解剖学证据表明,VTA内γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)能神经元支配多个捕猎和摄食相关的核团;课题组前期研究表明,VTAGABA可引起小鼠对饲料
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背景:捕猎是动物在进化过程中高度保留的一种行为,对于动物的生存和生长至关重要。早期研究表明,电刺激猫的腹侧被盖区(ventral tegmental area,VTA)可引发捕猎样攻击,但是其中具体的神经环路仍有待研究。神经解剖学证据表明,VTA内γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)能神经元支配多个捕猎和摄食相关的核团;课题组前期研究表明,VTAGABA可引起小鼠对饲料啃咬行为,这一行为与早期电刺激实验诱导的捕猎样攻击相似,提示VTA内GABA神经元可能介导捕猎行为。目的:本文采用光遗传技术研究小鼠VTA内GABA神经元对捕猎行为的调控,以期深化理解捕猎相关的脑内神经通路。方法:(1)通过脑立体定位技术在小鼠VTA内注射结构为AAV-VGAT-Cre和AAV-h EF1α-DIO-GCa MP6m的混合腺相关病毒,并在VTA正上方0.3 mm处埋入光纤插芯针。病毒感染4周后,采用光纤记录系统实时监测小鼠在捕猎蟋蟀过程中VTAGABA神经元活性变化,初步分析VTAGABA神经元和捕猎之间的关联性。(2)通过脑立体定位技术在小鼠VTA内注射结构为AAV-VGAT-Cre和AAV-h EF1α-DIO-Ch R2-m Cherry的腺相关病毒,致小鼠VTAGABA神经元特异性表达光通道蛋白Ch R2,并在VTA上方0.3 mm处埋入光纤插芯针。待病毒充分表达后,用473 nm蓝光特异性激活VTAGABA神经元,并用捕猎蟋蟀的行为学实验以及出窝觅食和物体探索的行为学实验研究VTAGABA神经元对小鼠捕猎行为的影响。(3)行为学完成后,对小鼠光刺激、灌流和取脑,进行c-Fos蛋白免疫荧光染色,观察VTA区域c-Fos蛋白表达情况。(4)同上方法,用光遗传技术研究小鼠腹侧被盖区投射到外侧下丘脑(lateral hypothalamus,LH)的GABA神经环路对捕猎行为的影响,探讨其神经环路机制。结果:(1)光纤记录实验结果表明,小鼠在捕猎过程中VTAGABA神经元活性升高。(2)光遗传技术特异性激活VTAGABA神经元促进小鼠对蟋蟀的捕猎行为,显著缩短小鼠发动捕猎的潜伏期(P<0.001),提高小鼠对蟋蟀的攻击概率(P<0.001),光刺激条件下Ch R2组小鼠造成的蟋蟀伤亡数量显著增加(P<0.001)。在觅食实验中,光遗传技术特异性激活VTAGABA神经元显著促进小鼠主动出窝觅食的行为,光刺激过程中小鼠出窝潜伏期和到达摄食区的潜伏期均显著缩短(P<0.001),小鼠到达摄食区后持续啃咬和叼动饲料,在摄食区的时间显著增加(P<0.001)。在物体探索实验中,光遗传技术特异性激活VTAGABA神经元显著增加小鼠对环境中不同物体探索,小鼠对物体产生明显的扒、啃咬和叼等类似捕猎样行为,物体的移动距离显著增加(P<0.05)。(3)光刺激显著增加VTA区域c-Fos蛋白的表达,VTA内c-Fos+细胞与m Cherry阳性神经元共标率为56.3%。(4)光遗传技术特异性激活VTA-LH的GABA能神经环路促进了小鼠对蟋蟀的捕猎行为,小鼠捕猎潜伏期缩短(P<0.001),捕猎概率提高(P<0.001),造成的蟋蟀伤亡数量也明显增加(P<0.001);光遗传技术特异性激活VTA-LH的GABA神经环路显著促进小鼠主动出窝觅食的行为,光刺激过程中小鼠出窝潜伏期和到达摄食区的潜伏期均显著缩短(P<0.001),在摄食区的时间显著增加(P<0.001);光遗传技术特异性激活VTAGABA神经元显著增加小鼠对环境中不同物体探索,物体的移动距离显著增加(P<0.05)。结论:1.小鼠腹侧被盖区GABA神经元可介导捕猎样行为;2.小鼠腹侧被盖区GABA神经元通过抑制LH参与介导捕猎样行为。
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