滇重楼提取物CV抑制云南宣威肺腺癌细胞株XWLC-05的实验研究

来源 :昆明医科大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:shiguangli010
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[目的]:研究从中药滇重楼中获得的代号为CV的提取物对云南宣威肺腺癌细胞株XWLC-05(Xuanwei Lung Cancer-05)的体外生长抑制作用,探讨其作用机制。[方法]:1.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同时间和不同浓度CV和CDDP对云南宣威肺腺癌细胞株XWLC-05及人胎肺细胞株KMB-17的生长抑制作用,设阴性对照组、溶剂对照组、实验组(加入CV)和阳性对照组(加入CDDP)确定半数抑制浓度(ICso);2.XWLC-05细胞株用CV及CDDP诱导24h后,用凯基活细胞/凋亡细胞/坏死细胞鉴别试剂盒(AO/EB法),在荧光显微镜下观察细胞凋亡状况;3.XWLC-05细胞株经CV及CDDP诱导48h后,用固定液处理,透射电镜扫描,观察细胞凋亡小体;4.XWLC-05细胞株及KMB-17细胞株经CV及CDDP诱导24h,用GENMED细胞凋亡DNA条带检测试剂盒处理,检测其凋亡条带。5.数据统计和分析采用SPSS17.0软件包进行。数据以均数±标准差(x±s)表示,组间资料应用单因素方差分析(ONE WAY ANOVA)和t检验。[结果]:1.CV及CDDP对XWLC-05细胞及KMB-17细胞的体外抑制作用,其IC50值如下表:上述数据顺铂组两两比较P值无统计学意义,提取物CV组两两比较,XWLC-05细胞与KMB-17细胞比较P<0.05(P=0.0217),具有统计学意义。在后期的实验研究中,重点做CV诱导XWLC-05细胞的凋亡实验。2.CV及CDDP诱导XWLC-05细胞24h后经AO/EB法处理后,荧光显微镜观察,均有凋亡细胞产生;3.CV及CDDP诱导XWLC-05细胞24h后固定液处理,电镜扫描图片显示有凋亡小体产生;4.CV及CDDP诱导XWLC-05细胞24h后经GENMED细胞凋亡DNA条带检测试剂盒处理,在100-200bp之间可见DNA片断化改变的“梯形”条带。[结论]:1.CV可以抑制XWLC-05细胞体外增殖,其抑制作用呈剂量和时间依赖性;2.CV可以促进XWLC-05细胞的凋亡,形成新月形的凋亡早期细胞,也可形成胞质芽状突起的凋亡晚期细胞;形成凋亡小体;3.CV能促进XWLC-05细胞的凋亡,在100-200bp之间形成明显的断裂条带,而在一定的浓度范围内作用于KMB-17细胞未形成断裂条带。
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