论文部分内容阅读
目的:1.通过观察鞘内注射ATP敏感性钾离子通道的开放剂吡那地尔、阻滞剂格列苯脲对骨癌痛大鼠机械缩爪阈值的影响,探讨KATP通道的功能活性状态在骨癌痛大鼠痛觉超敏中的作用。2.鞘内应用针对KATP通道亚基Kir6.2的小干扰RNA来抑制脊髓背角神经元上KATP通道的表达,并观察大鼠痛觉阈值的变化,探讨KATP通道的表达量在骨癌痛发生机制中的作用。方法:1.雌性SD大鼠60只,体重150～180g,随机分为10组,每组6只。正常对照组(control组):正常大鼠,不做任何处理;骨癌痛组(BCP组):骨癌痛模型大鼠鞘内不注入任何药物;骨癌痛+人工脑脊液组(BCP+aCSF组):模型大鼠鞘内注入aCSF 10μL;骨癌痛+二甲基亚砜组(BCP+DMSO组):模型大鼠鞘内注入DMSO 10μL;骨癌痛+100μg吡那地尔组(BCP+100μg Pinacidil组):模型大鼠鞘内注入10g/L吡那地尔10μL;骨癌痛+30μg吡那地尔组(BCP+30μg Pinacidil组):模型大鼠鞘内注入3g/L吡那地尔10μL;骨癌痛+10μg吡那地尔组(BCP+10μg Pinacidil组):骨癌痛模型大鼠鞘内注入1g/L吡那地尔10μL;骨癌痛+50μg格列苯脲组(BCP+50μg Glybenclamide组):模型大鼠鞘内注入5g/L格列苯脲10μL;骨癌痛+150μg格列苯脲组(BCP+150μg Glybenclamide组):模型大鼠鞘内注入15g/L格列苯脲10μL;骨癌痛+500μg格列苯脲组(BCP+500μg Glybenclamide组):模型大鼠鞘内注入50g/L格列苯脲10μL。观察大鼠在模型制作前和制作后第1,3,5,7,9,11,13,15天时的疼痛行为学变化,并测定机械缩爪阈值。各组大鼠在鞘内注药前及注药后第15,30,45,60分钟时测定机械缩爪阈值。2.雌性SD大鼠36只,体重150～180g,随机分为6组,每组6只。正常对照组(control组):正常大鼠,不做任何处理;正常大鼠+特异的siRNA组(N+specific siRNA组):正常大鼠鞘内给予特异的siRNA 0.25 nmol;正常大鼠+非匹配的siRNA组(N+mismatch siRNA组):正常大鼠鞘内注入非匹配的siRNA 0.25 nmol;骨癌痛组(BCP组):骨癌痛模型大鼠鞘内不给予任何药物;骨癌痛+特异的siRNA组(BCP+specific siRNA组):模型大鼠鞘内注入特异的siRNA 0.25 nmol;骨癌痛+非匹配siRNA组(BCP+mismatch siRNA组):模型大鼠鞘内注入非匹配的siRNA 0.25 nmol。观察测定大鼠在模型制作前和制作后第1,3,5,7,9,11,13,15天时机械缩爪阈值的变化。各组大鼠在鞘内给予siRNA前及后第1,3,5,7天时测定机械缩爪阈值。大鼠在测痛结束后取脊髓腰膨大段,提取RNA,实时定量PCR检测各组Kir6.2 mRNA的相对表达量。结果:1.骨癌痛模型制作前各组大鼠机械缩爪阈值无显著差异。从模型制作后第五天开始,与正常大鼠比较,骨癌痛模型大鼠的机械缩爪阈值出现明显的下降。模型大鼠鞘内注射吡那地尔后各时间点机械缩爪阈值较BCP组有明显升高(P<0.05),且升高幅度呈剂量依赖性。BCP组、BCP+DMSO组及BCP+aCSF组之间机械缩爪阈值的差异无显著意义(P>0.05)。模型大鼠鞘内注射格列苯脲后各时间点机械缩爪阈值较BCP组有明显下降(P<0.05),且降低幅度随格列苯脲剂量加大而增大。2.相对于control组,正常大鼠在鞘内给予特异的siRNA后机械缩爪阈值出现较明显的下降(P<0.05),且脊髓腰段Kir6.2 mRNA表达量也明显减少(P<0.05),而control组和N+mismatch siRNA组之间的机械缩爪阈值和脊髓腰段Kir6.2 mRNA表达量都无明显差异。与BCP组相比,骨癌痛模型大鼠在鞘内给予特异的siRNA后机械缩爪阈值出现较明显的下降(P<0.05),脊髓腰段Kir6.2 mRNA表达量也出现较明显的下降(P<0.05),而BCP组与BCP+mismatch siRNA组之间的差异均无显著意义。相对于control组,骨癌痛大鼠脊髓腰段Kir6.2 mRNA表达减少。结论:1.脊髓背角神经元上KATP通道的功能状态对骨癌痛大鼠的痛觉超敏有明显影响,通道开放增加,机械痛觉超敏减弱;而通道开放减少,机械痛觉超敏增强。改变脊髓背角神经元上KATP通道的功能状态可能对骨癌痛起到一定的治疗作用。2.脊髓背角神经元上KATP通道的表达量也与大鼠的痛觉阈值密切相关,表达下调时大鼠痛觉阈值下降。改变脊髓背角神经元上KATP通道的表达,也有可能应用于骨癌痛治疗。3.脊髓背角神经元上KATP通道可能在骨癌痛的痛觉超敏形成与维持中起一定作用。