目的:1.考察淫羊藿苷人工胃肠液及肠道菌群中的稳定性。2.建立灵敏度高、专属性强、方便可行的HPLC-MS/MS分析方法,测定生物样品中淫羊藿苷及其代谢产物淫羊藿次苷Ⅱ的浓度。3.进行中国健康志愿者单次口服XX胶囊（淫羊藿总黄酮提取物）后淫羊藿苷及其代谢物淫羊藿次苷Ⅱ的药代动力学研究。4.进行大鼠灌胃淫羊藿苷单体及XX胶囊的药动学差异比较研究。5.采用Caco-2细胞培养淫羊藿苷考察其是否被小肠细胞代谢,阐明其生物利用度低的原因。方法:1.采用HPLC-UV法研究淫羊藿苷在人工胃肠液中的稳定性。以乙腈:0.1%甲酸（30:70,V/V）为流动相,采用Agilent Extend C₁₈（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱分离,DAD检测器,波长274nm,流速1mL·min^-1,进样量20μL。2.血浆经经乙酸乙酯提取、吹干、复溶后,以0.1%甲酸—乙腈（30:70,V/V）为流动相,采用AGT Venusil XBP-C₁₈（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱分离,流速1.0mL·min^-1,柱温30℃,进样量20μL;ESI源,正离子模式,雾化压力为40 psi,干燥气（N₂）流速为9 L·min^-1,干燥气温度为350℃,毛细管电压4000V。多级反应监测（MRM）方式,m/z 677.1→369.0（淫羊藿苷）,m/z 515.1→369.1（淫羊藿次苷Ⅱ）,m/z321.0→275.0（内标）,扫描间隔为200ms。淫羊藿苷碰撞能量为28eV,碎片电压为135V,淫羊藿次苷Ⅱ碰撞能量为8eV,碎片电压为100V,内标碰撞能量为20eV,碎片电压为135V,电子倍增器电压为800V。3.8名健康志愿者,男女各半,单次口服15粒XX胶囊,留取血样采用。HPLC-MS/MS法检测血浆中淫羊藿苷及淫羊藿次苷Ⅱ的浓度,采用DAS2.0实用药代动力学程序进行模型拟合并计算其药代动力学参数。4.16只大鼠随机分为两组,分别灌胃给予相同剂量的淫羊藿苷单体及XX胶囊内容物（以淫羊藿苷计）,留取血浆样本,采用HPLC-MS/MS法检测淫羊藿苷及淫羊藿次苷Ⅱ药物浓度,采用非房室模型药代动力学程序PKSolver计算药代动力学参数,评价淫羊藿苷单体及XX胶囊内容物大鼠药代动力学差异。5.将淫羊藿苷与Caco-2细胞共同孵育,收集基底侧样本,测定淫羊藿苷及其代谢物浓度。结果:1.淫羊藿苷在37℃人工胃液中孵育2小时后,仍有90%以上的原形药物。但在人工肠液中孵育12h后,淫羊藿苷减少至80%,表明淫羊藿苷在人工肠液中可被破坏分解。进一步采用HPLC-MS/MS法观察淫羊藿苷在人体肠道菌群的稳定性。结果发现,淫羊藿苷极易被肠道菌群水解,孵育1h后,淫羊藿苷几乎被水解完全,而水解产物淫羊藿次苷Ⅱ也易被肠道菌群进一步水解,产生淫羊藿素,同时发现疑似C₆-异戊烯基异构化的淫羊藿素。通过比较人、大鼠肠道菌群对淫羊藿苷及淫羊藿次苷Ⅱ的代谢过程可知,二者较为相似,但大鼠肠菌对淫羊藿次苷Ⅱ的降解速度较为缓慢,且生成的淫羊藿素的量相对较少。2.HPLC-MS/MS法测定人血浆中淫羊藿苷及淫羊藿次苷Ⅱ浓度,淫羊藿苷及淫羊藿次苷Ⅱ在0.05～10ng·mL^-1浓度范围内线性关系良好,回归方程分别为Y=0.2766X+0.0197,（r=0.99302）,Y=0.4331X+0.0824,（r=0.99357）。最低定量限均为0.05 ng·mL^-1,绝对回收率分别大于65%和55%,相对回收率范围为85%-120%,批内变异均小于10%,批间变异均小于15%,淫羊藿苷与淫羊藿次苷Ⅱ血浆中冷冻及反复冻融条件下稳定。3.健康志愿者单次口服15粒XX胶囊后,血浆中检测到淫羊藿次苷Ⅱ及微量淫羊藿苷。淫羊藿次苷Ⅱ在健康志愿者体内的药代动力学过程符合权重系数为1/c的一室模型,其主要药代动力学参数:t_1/2为（8.954±3.424）h,AUC_0-12为（9.642±4.520）ng·mL^-1·h,AUC_0～∞为（12.884±6.750）ng·mL^-1·h。男女健康志愿者各药代动力学参数经双侧t检验显示无统计学意义,提示淫羊藿次苷Ⅱ体内药代动力学行为不存在性别差异。4.大鼠灌胃相同剂量（50mg/kg,以淫羊藿苷计）淫羊藿苷单体及XX胶囊内容物后淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的药时曲线出现双峰现象,单体组大鼠血浆淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的浓度均高于XX胶囊组。用非房室模型计算药动学参数,灌胃给予淫羊藿苷单体及XX胶囊内容物后淫羊藿苷的主要药动学参数分别为t_1/2（3.612±1.067）h和（6.022±3.381）h,T_max（0.958±0.668）h和（1.219±1.129）h,C_max（21.037±9.090）ng·mL^-1和（14.904±4.492）ng·mL^-1,AUC_0-12（78.488±42.653）ng·mL^-1·h和（42.532±13.839）ng·mL^-1·h,AUC_0～∞（87.054±45.391）ng·mL^-1·h和（51.214±13.043）ng·mL^-1·h。淫羊藿次苷Ⅱ的主要药动学参数分别为t_1/2（3.014±1.358）h和（17.171±10.170）h,T_max（3.938±2.275）h和（0.938±0.477）h,C_max（20.943±8.583）ng·mL^-1和（5.448±2.381）ng·mL^-1,AUC_0-12（87.101±24.814）ng·mL^-1·h和（18.822±10.160）ng·mL^-1·h,AUC_0～∞（96.295±22.934）ng·mL^-1·h和（35.161±8.405）ng·mL^-1·h。灌胃淫羊藿苷单体后,淫羊藿次苷Ⅱ的达峰时间与淫羊藿苷相比明显延后,峰浓度和AUC均有明显降低。这也印证了第一部分的结论,淫羊藿苷在肠道菌群的作用下水解为淫羊藿次苷Ⅱ,因而淫羊藿次苷Ⅱ的达峰时间较为靠后;淫羊藿苷除水解为淫羊藿次苷Ⅱ外,还能进一步水解为淫羊藿素,故淫羊藿次苷Ⅱ的峰浓度较低。但在所有大鼠的血浆中均未检测到淫羊藿素,这可能与淫羊藿素在小肠上皮细胞吸收较差有关。灌胃给予淫羊藿苷单体后,淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的峰浓度、AUC均高于灌胃XX胶囊内容物,由此可以充分说明,XX胶囊这种黄酮苷混合物的给药方式不利于淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的吸收。对灌胃淫羊藿苷单体和XX胶囊内容物后淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ主要药动学参数进行统计学分析,结果表明淫羊藿苷除AUC_0-12和AUC_0～∞具有统计学意义外,其余参数均无统计学意义,而淫羊藿次苷Ⅱ主要药动学参数均具有统计学意义。5.10μg·mL^-1淫羊藿苷Caco-2细胞孵育试验结果表明,淫羊藿苷可被Caco-2细胞内的酶系代谢分解为淫羊藿次苷Ⅱ和淫羊藿素的异构体。结论:1.淫羊藿苷在胃内相对稳定,在人工肠液中孵育12小时尚有80%原形存在,但在肠道菌群的作用下可被迅速分解为淫羊藿次苷Ⅱ,并进一步分解为淫羊藿素。2.健康志愿者口服XX胶囊后检测到淫羊藿次苷Ⅱ和微量的淫羊藿苷,男女志愿者之间药动学参数无统计学差异。3.大鼠灌胃淫羊藿苷单体和XX胶囊内容物后,单体组大鼠淫羊藿苷及淫羊藿次苷Ⅱ血药浓度均高于胶囊组,经统计学分析淫羊藿次苷Ⅱ主要药动学参数具有显著差异。4.淫羊藿苷可被Caco-2细胞代谢分解,因而影响淫羊藿苷的生物利用度。5.整个试验过程顺利,志愿者依从性好,未见任何不良反应发生。