女贞子抗氧化活性成分及紫外光谱模式识别研究

来源 :成都中医药大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:lengzhichao12321
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很多疾病的发生都与自由基有关,如癌症、动脉粥样硬化症、老年痴呆症、帕金森综合症等,以及胃肠消化、内分泌、新陈代谢、衰老等慢性疾病,都是由于氧自由基积累过多,以及自由基攻击生命大分子所造成的组织损伤有关。如何有效的清除体内过多的自由基,对保持机体自身平衡有着重要的意义。现代研究已经发现某些中药的功效与其抗氧化作用有密切关系。女贞子是木犀科女贞属常绿灌木或小乔木女贞(Ligustrum lucidum Ait)成熟干燥的果实。本品呈卵形、椭圆形或肾形,表面黑紫色或灰黑色。近年来研究表明,女贞子具有较强的体外抗氧化活性。因此研究女贞子的抗氧化活性成分,可以为揭示女贞子抗氧化化学成分与其某些功效的关系,为女贞子的开发和利用提供依据。本文通过测试样品清除DPPH自由基能力的大小来评价女贞子及其化学成分的抗氧化活性。首先对女贞子的甲醇提取物及其甲醇提取物的石油醚萃取部、甲醇提取物的乙酸乙酯萃取部、甲醇提取物的正丁醇萃取部、甲醇提取物的萃余部进行抗氧化活性评价。筛选出抗氧化活性较强的为乙酸乙酯萃取部和正丁醇萃取部。再对乙酸乙酯部位用硅胶柱层析进行初步分离,并进行抗氧化活性测试。将抗氧化活性较强的部分,继续进行化学成分的分离。采用硅胶柱层析、 SephadexLH-20层析、重结晶等分离手段,一共分离得到了28个化学成分,利用核磁共振氢谱、碳谱、gCOSY、HMBC、HMQC等方法,鉴定了其中的20个化学成分:乙酰齐敦果酸(1)、β-谷甾醇(2)、19 α-羟基-3-乙酰熊果酸(3)、齐墩果酸(4)、熊果酸(5)、19a-羟基熊果酸(6)、19α羟基齐墩果酸(7)、20(S)-3β,20-二羟基-24-过氧羟基达玛烷-25-烯(8)、白桦脂醇(9)、19β-羟基-3-乙酰熊果酸(10)、山楂酸(11)、对羟基苯乙醇(12)、芹菜素(13)、3’,5’,2,4,6,p-六羟基二氢查尔酮(14)、木犀草素(15)、槲皮素(16)、β-胡萝卜昔(17)、芦丁(18)、大波斯菊苷(19)、橄榄苦苷(20)。3’,5’,2,4,6,p-六羟基二氢查尔酮是一个新的化合物。并对部分化学成分进行了清除DPPH自由基能力的测试,其中三萜类化合物都有一定的抗氧化活性,但抗氧化活性最高的是黄酮类物质芹菜素、槲皮素、芦丁等和环烯醚萜类橄榄苦苷。总三萜的抗氧化活性明显高于单一三萜的抗氧化活性。利用HPLC法测定女贞子中主要三萜与DPPH自由基反应后,峰面积减少率,来评价其抗氧化活性的相对大小。齐墩果酸和熊果酸混合物的峰面积减少率最大,为46.80%。说明在体系中,二者参与程度较大。色谱图中减少最多的是极性较大的混合物部分,说明女贞子中极性较大部分的化合物有着很强的抗氧化活性。本实验表明:适当的色谱条件下,用等量的溶剂代替DPPH自由基溶液作为空白对照组,通过计算各组分的色谱峰面积的变化率,来确定和评价各组分参与抗氧化反应的程度,此方法也可以用于中药提取物的复杂体系中,进行抗氧化活性成分的初步筛选。三萜是女贞子中的主要活性成分之一,也有着一定的抗氧化活性.。利用HPLC法对女贞子中的四种主要三萜类化合物齐墩果酸、熊果酸、乙酰齐墩果酸、山楂酸的含量进行了测定。齐墩果酸的含量最高,平均每克女贞子含齐墩果酸3.44-5.95 mg;乙酰齐墩果酸,平均每克含量在0.54-6.77mg间波动,样本间差异较大;熊果酸的含量在每克0.67-1.72mg间;山楂酸的含量在每克1.07-2.66mg间。考察了不同等级和不同光照条件对女贞子提取物收率及抗氧化活性的影响,颗粒越饱满的女贞子提取物收率越高,抗氧化活性越强,但同等条件下光照越充足的女贞子,其抗氧化活性越强。四个样本中,光照充足,颗粒最大的样品D每粒重量平均为0.0500g,提取物收率最高为25.41%,DPPH自由基清除率也最高,为34.87%。考察了生长周期对女贞子抗氧化活性的影响,生长越长,抗氧化活性越强。采自同一棵女贞树,相同区域,但不同年份产的女贞子,抗氧化活性有较大的差异。考察了女贞花、女贞枝条和女贞树叶的抗氧化活性,发现女贞花有着极强的抗氧化活性,DPPH自由基清除率可达95.36%,女贞树叶也有较强的抗氧化活性,DPPH自由基清除率为29.00%。由于紫外可见光谱可以较为全面的反应女贞子中化学成分的信息,建立了女贞子的紫外可见光谱结合主成分分析方法,对女贞子及非女贞子样品进行了区分。此方法可以对女贞子药材和非女贞子药材进行显著的区分,对来源于不同的树木的女贞子样品也有较好的区分效果。此方法可以用于女贞子药材及其提取物的质量控制,避免单一化学成分检测带来的不确定性,也可用于其它的中药材、中药材提取物及制剂的质量控制手段之一
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