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目的:目前,白色脂肪棕色化在治疗肥胖症及其相关代谢性疾病中具有积极意义。在我们前期的研究中,已经发现Osteopontin(OPN)能够实现白色前脂肪细胞的棕色化诱导。本研究通过脂肪组织特异性靶向OPN的干扰腺病毒(Ad-aP2-OPN-shRNA)感染正常和肥胖小鼠下调脂肪组织中OPN,从动物水平研究下调OPN对小鼠白色脂肪棕色化的影响及潜在作用机制。方法:首先,选取40只健康雄性C57BL/6小鼠,随机分成两组,其中一组高糖高脂饮食(HFD),待12周后,肥胖模型成功建立;另一组则正常饮食(Normal)作为对照。随后,HFD组选取15只造模成功的肥胖小鼠,随机分成3组,分别尾静脉注射磷酸盐缓冲液(PBS)、阴性对照腺病毒(Vehicle)和Ad-aP2-OPN-shRNA特异性腺病毒,Normal组同样进行上述操作。该实验最后的实验分组为Ctrl组、Vehicle组、sh-OPN组和Obese组、Obese+Vehicle组、Obese+sh-OPN组。最后,通过Western Blotting法和ELISA法分别检测iOPN和sOPN的表达水平,确定Ad-aP2-OPN-shRNA特异性腺病毒感染小鼠使其OPN下调后,检测以下指标:(1)体重(Weight)、身长(Length)、Lee’s指数(Lee’s Index)和脂肪指数(FI);(2)称量腹股沟(皮下)白色脂肪(IWAT)、附睾白色脂肪(EWAT)、肾周白色脂肪(PWAT)、脊柱旁白色脂肪(RWAT)、肩胛区棕色脂肪(IBAT)、肝、心、脾、肺和肾的重量;(3)HE染色观察腹股沟白色脂肪、附睾白色脂肪、肾周白色脂肪和脊柱旁白色脂肪的细胞形态;(4)检测各组小鼠的各项生化指标(空腹血糖FPG、血胰岛素FINS、血甘油三脂TG、血胆固醇TCH、胰岛素抵抗指数HOMA-IR和血抵抗素Resistin);(5)油红O染色观察肝脏脂肪代谢情况;(6)免疫组化法检测腹股沟白色脂肪中PGC-1α、PRDM16和UCP-1的表达水平;(7)Western Blotting法检测腹股沟白色脂肪中PI3K、AKT、AKT-pS473、PPARγ的蛋白表达水平以探讨作用机制。结果:(1)脂肪组织特异性腺病毒Ad-aP2-OPN-shRNA感染小鼠后,小鼠脂肪组织中iOPN和血清中sOPN的水平下降。(2)OPN下调后,小鼠体形及各部位脂肪组织的形态大小更大,且肥胖组比正常组更加明显。(3)OPN下调后,正常组小鼠的体重、体长、Lee’s指数和脂肪指数FI无明显差异,但肥胖组小鼠体重和Lee’s指数显著性降低。(4)HE染色结果显示:OPN下调后各部位脂肪组织的细胞形态变大。(5)OPN下调后,小鼠各部位脂肪组织及各脏器重量增加,但只有肥胖组的腹股沟脂肪和肝脏具有统计学意义。(6)OPN下调后,小鼠各项生化指标(空腹血糖FPG、血胰岛素FINS、血甘油三脂TG、血胆固醇TCH、胰岛素抵抗指数HOMA-IR和血抵抗素Resistin)呈现上升趋势。(7)油红O结果显示:OPN下调后,肝脏内脂肪含量增加。(8)免疫组化结果显示,OPN下调后腹股沟白色脂肪组织中棕色化标志蛋白(PGC-1α、PRDM16和UCP-1)的表达水平下降。(9)根据Western Blotting结果,小鼠腹股沟白色脂肪组织中PI3K、AKT-pS473、PPARγ表达水平下降。结论:C57BL/6小鼠感染脂肪组织特异性腺病毒Ad-aP2-OPN-shRNA后OPN下调,OPN下调后抑制小鼠白色脂肪组织棕色化,而这一作用机制可能是通过PI3K-AKT通路介导抑制PPARγ进而抑制白色脂肪组织棕色化。