繁殖性状是家兔的重要经济性状之一,其性能不仅影响母兔的繁殖力,而且直接影响养兔生产的经济效益。我国家兔繁殖年出栏商品兔的数量和欧洲发达国家存在一定差距。鉴于母兔产后发情具有普遍性,本实验选用了新西兰白兔作为研究对象,采用频密繁殖和半频密繁殖进行配对实验,探究现代规模化兔场养殖适用繁殖方式。此外,在频密繁殖组新西兰母兔中筛选出耐频密繁殖和不耐频密繁殖两个比较组,采取母兔卵巢组织,利用转录组和蛋白质组学进行分析,以期能筛选出与新西兰白兔繁殖耐受相关的差异基因和差异蛋白,实验结果如下:1.为了分析不同配种方式对家兔繁殖和生产性能的影响,设置了频密繁殖与半频密繁殖组,每组30只新西兰母兔,频密繁殖(A组)在分娩后1天内配种,半频密繁殖(B组)在分娩后18天配种,连续繁殖两次,统计体重、产仔数、仔兔出生窝重等指标。结果发现频密繁殖组与半频密繁殖组在产仔数、产活仔数、仔兔窝重和初生个体重的影响差异均不显著(P>0.05),但频密繁殖组母体产后体重变化与半频密繁殖组频密繁殖组差异显著(P<0.05),频密繁殖母兔产后自身体重出现下降趋势,半频密繁殖母兔产后自身体重基本没有变化。因此,频密繁殖虽然可获得较多的后代数量,但此高强度繁殖方式不适用于长期进行繁殖,对母体损伤较大。2.进一步采用RNA-Seq技术对频密繁殖组中耐受组和不耐受组的卵巢组织进行分析,用|log2fold change|≥1&P<0.05作为差异基因筛选阈值,结果显示耐受组和不耐受组共筛选出1648个差异表达基因,其中上调基因有563个,下调基因有1085个。差异表达基因GO和KEGG分析结果显示,差异表达基因GO富集于生殖相关的基因有99个,其中上调基因16个,下调基因有83个,包括IHH和OVGP1等与生殖器官分化发育相关基因。KEGG分析表明有关繁殖差异表达基因显著富集的信号通路有类固醇生物合成、卵巢类固醇激素合成和叶酸生物合成等通路。通过qRT-PCR技术,检测了 ZP1、CYP19A1、OVGP1 和 BMP6,与 RNA-Seq 测序结果相一致。通过 RNA-Seq数据分析,IHH、OVGP1、BMP-6、CYP19A1等可能与新西兰白兔繁殖耐受相关。3.采用4D-LFQ技术对耐频密繁殖组和不耐频密繁殖组卵巢组织进行蛋白质组学分析,以FC1.5倍&P<0.05作为差异表达蛋白的筛选标准,共筛选获得差异蛋白质总数为427个,其中上调差异蛋白质253个,下调差异蛋白质174个,包括CYP51A1、CYP17A1、CYP11A1、LDLR等繁殖相关蛋白。差异表达蛋白GO分析主要富集于胆固醇生物合成、二醇生物合成、类固醇代谢调节、调节胆固醇代谢、肽酶活性的负调控、调节胆固醇生物合成、碳酸氢盐运输等过程。KEGG富集分析表明差异蛋白参与类固醇生物合成通路和卵巢类固醇生成等繁殖相关通路。进一步通过转录组和蛋白质组联合分析发现CD68、GPNMB、MCM4等是与卵巢癌紧密相关的蛋白,提示这些基因可能与新西兰母兔繁殖耐受负相关。4.根据转录组和蛋白质组测序结果,发现耐频密繁殖组和不耐频密繁殖组中,CYP11A1基因mRNA表达水平差异不显著,但蛋白水平差异显著。进一步克隆了CYP11A1的CDS全长序列,为1557bp。运用生物信息学方法对CYP11A1的结构和功能进行预测分析,发现CYP11A1蛋白为不稳定蛋白,等电点为4.91,蛋白二级结构以a螺旋和无规卷曲为主,三级结构呈弯曲螺旋状,共有40个潜在磷酸化位点。进一步分离和鉴定了卵巢颗粒细胞,并进行了 CYP11A1基因的过表达和干扰实验,发现CYP11A1基因的表达量改变,可显著影响HSD17B1、BMP15和FSHR基因的表达变化(P<0.05),进而影响母兔的繁殖机能。该部分结果为深入探究关键蛋白CYP11A1在母兔繁殖性能方面的调控作用提供理论依据。