论文部分内容阅读
目的:从星形胶质细胞活化及谷氨酸摄取和释放的角度,探讨金荞麦总黄酮对大鼠脑缺血再灌注后兴奋性氨基酸毒性的保护作用,为其在脑缺血损伤中的应用奠定药理基础。方法:线栓法复制大脑中动脉栓塞再灌注（MCAO/R）大鼠模型。将252只雄性SD大鼠,随机分为假手术组（Sham）、脑缺血再灌注组（CIR）、脑心通胶囊组(NXT,0.8 g·kg-1)、金荞麦总黄酮高(JQM HD,0.1 g·kg-1)、中(JQM MD,0.05 g·kg-1)、低(JQM LD,0.025 g·kg-1)剂量组,每组再分为6h、24h、48h三个亚组。除Sham组和CIR组外,其余各组连续7d灌服脑心通胶囊和金荞麦总黄酮CMC-Na混悬液,于第7d灌胃1h后复制大鼠MCAO/R模型;Sham组不插线栓,其它操作同CIR组。（1）大鼠神经功能缺损评分:分别对各组6h、24h、48h三个亚组的大鼠做神经评分,观察MCAO/R大鼠神经损伤情况。（2）形态学观察:于造模后各时间点进行取材,观察脑组织水肿情况,计算各组脑指数;TTC染色法检测脑梗死面积;HE染色观察脑组织神经元细胞形态。（3）相关因子的检测:检测脑组织Glu、Gln水平、GS、ATP酶活性,血清S-100β、NSE水平。（4）谷氨酸代谢相关蛋白的检测:免疫组化法观察各组大鼠脑组织海马CA1区和皮质区GFAP、VGLUT-1、GLT-1的表达,Western Blot检测缺血侧脑组织GFAP、VGLUT-1、GLT-1、GS的表达。结果:（1）改善CIR大鼠的神经功能缺损。神经评分结果显示,CIR 6h即出现严重的神经功能缺损症状,CIR 24h、48h神经缺功能损程度进一步加重。金荞麦总黄酮各剂量组于再灌注6h、48h后能明显降低大鼠神经评分,再灌注24h后各给药组神经评分也有所降低。（2）降低脑指数、减少脑梗死体积。CIR组再灌注6h大脑即出现明显的梗死,24h梗死区域进一步扩大,颜色苍白,CIR 48h与CIR 24h相比,脑梗死区域有所减小;与同时间点的CIR组相比,JQM HD、JQM MD组白色区域明显减少,脑梗死体积、脑指数显著降低。（3）改善CIR大鼠相关生化指标。CIR 6h、24h、48h组大鼠血清NSE、S-100β、脑组织Glu、Gln、GS水平显著升高（P<0.01或P<0.05）,且GS水平随CIR时间的延长逐渐升高;与同时间点的CIR组相比,JQM HD、JQM MD组可见NSE、S-100β、Glu水平显著降低（P<0.05）,JQM HD组可见Gln、GS水平较CIR组进一步升高。（4）改善CIR大鼠脑组织病理损伤,增加脑组织ATP酶活性。CIR后海马和皮质神经元发生了明显的病理损伤,神经元细胞排列紊乱,水肿,胞间隙增大,细胞空泡样变性,核明显固缩,大量细胞坏死;NXT和JQM HD组结构稍完整可辨的神经元较多,可明显降低细胞水肿,改善海马、皮质区神经元的病理损伤。CIR 6h时脑组织ATP酶活性显著下降,CIR 24h时活性最低;与同时间点的CIR组比较,JQM HD组ATP酶活性显著升高（P<0.01）。（5）调节CIR大鼠脑组织GFAP的表达。CIR 6h时即可见海马CA1区和皮质区GFAP表达阳性的AS数量显著增加,突起延长,着色变深,且随着CIR时间的延长,其表达在海马CA1区逐渐增加;皮质区CIR 24h阳性表达最高。金荞麦总黄酮各剂量组在CIR 6h时可显著上调GFAP表达,CIR 24h、48h时可下调GFAP的表达。（6）调节CIR大鼠脑组织VGLUT-1、GLT-1的表达。正常脑组织海马CA1区VGLUT-1的表达很少,CIR后VGLUT-1表达增加,并且随着CIR时间的延长,呈上升趋势;皮质区CIR 24h时阳性表达最高;金荞麦总黄酮各剂量组在CIR后可明显下调VGLUT-1的表达。正常脑组织中海马CA1区和皮质区GLT-1的表达紧紧包围着神经元,表达较高,而CIR 6h时GLT-1的表达即出现明显降低,CIR 24h时下降显著,CIR 48h有所升高,但仍处于较低水平;JQM各剂量组可明显上调GLT-1的表达。结论:VGLUT-1参与脑缺血再灌注后Glu的兴奋性毒性损伤,金荞麦总黄酮可降低Glu的兴奋性毒性,对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其作用机制可能与改善脑能量代谢,调节星形胶质细胞活化,抑制VGLUT-1的表达,促进GLT-1的表达有关。