目的:肝癌是最常见的恶性肿瘤之一,对化疗和放疗均不敏感,能手术根治仅占 15%,易早期转移和术后复发、转移。免疫基因治疗是近年来出现的最有希望的预防和治疗原发性肝癌的候选方案之一。Fractalkine (FK)是一种 CX3C 趋化因子,具有强烈的趋化 T 淋巴细胞、单核细胞及 NK 细胞功能,在机体的炎性反应和免疫应答过程中发挥重要作用。本实验用 FK 基因修饰肝癌细胞制备肿瘤疫苗,观察其诱导的抗肿瘤效应及其免疫应答机制,为进一步探索联合基因治疗肿瘤及其转移提供实验基础和依据。 方法: 1.FK 真核表达载体在小鼠肝癌细胞系 MM45T.Li 细胞中的表达:采用阳离子脂质体转染方法,转染小鼠肝癌细胞系 MM45T.Li 细胞,用 G418 加压并以有限稀释法筛选出高效表达 FK 的抗性细胞克隆。用RT-PCR 和免疫细胞化学法检测 FK 在 MM45T.Li 细胞中的转录表达;光学显微镜观察质粒转染后细胞形态的变化;用 3H-TdR 掺入法检测转染质粒后对细胞增殖的影响;用 Transwell 检测体外 FK 的趋化活性。 2.FK 基因修饰肿瘤疫苗的抗肿瘤作用的研究:在 BALB/c 小鼠右侧腋部皮下接种建立三组实验动物模型,①MM45T.Li(野生型细胞),MM45T.Li-mock(空载体转染细胞)和 MM45T.Li-FK(FK 基因转染细胞),观察 FK 基因修饰瘤苗的抗肿瘤作用;另先接种 FK 基因转染细胞 4 周后,在原接种部位对侧再次接种野生型亲本细胞,观察瘤苗的