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目的：OX40/OX40L是一对重要的共刺激分子，主要作用在效应T细胞的晚期应答阶段，表达高峰在T细胞接触抗原后72-96h，对T细胞的长期存活，更多记忆T细胞的生成，刺激树突状细胞(Dendritic cell，DC)的分化成熟均有重要的作用。相关研究提示OX40/OX40L通路很可能在T细胞特异性免疫中发挥重要作用并在实体器官移植的免疫保护中具有潜在的临床应用价值。本研究构建了含OX40基因siRNA片段的真核表达载体pRNAT-U6.1/Neo。观察活体应用siRNA技术干预OX40/OX40L通路对小鼠移植心脏的免疫保护作用。为进一步研究OX40/OX40L通路在移植免疫耐受中的作用和机制提供实验依据，并开启一条新的诱导免疫耐受的途径。
方法：供体为C57/BL6J(H-2b)，DBA/2(H-2d)，受体为Balb/C(H-2d)，均为雄性，SPF级，体重25～30g。根据不同品系的组合及模型建立后胸腺注射物的不同分为以下几组：(1)主要组织相容性复合体(MHC)不合(C57/BL6J→Balb/C)：共72只，C57/BL6J和Balb/C各36只，把造模成功后的小鼠随机分为3组，每组12只。Ⅰ生理盐水空白对照组，ⅡpRNAT-CTL阴性对照组，ⅢpRNAT-OX40siRNA处理组。各组于手术后第1，第4天乙醚吸入麻醉后胸腺注射含有阳离子聚合物的溶液40μl。(2)次要组织相容性复合体(mHC)不合(DBA/2→Balb/C)：共72只，DBA/2和Balb/C各36只，把造模成功后的小鼠随机分为3组，每组12只。Ⅳ生理盐水空白对照组，Ⅴ pRNAT-CTL阴性对照组，Ⅵ pRNAT-OX40siRNA处理组。术后处理同(1)。观察移植心脏和受体存活情况。术后第7天取移植心脏行病理学检查，(2)组取血清检测心肌酶谱，取脾脏行RT-PCR和Western Blot检测OX40mRNA表达和OX40膜蛋白表达情况。
结果：在C57/BL6J→Balb/C组合中(MHC不合)，pRNAT-OX40siRNA组移植心脏生存时间较生理盐水组和阴性对照组无明显延长，移植心脏病理学检查无明显改善。而在DBA/2→Balb/C组合中(mHC不合)，pRNAT-OX40siRNA组小鼠移植心脏生存时间较生理盐水组和阴性对照组显著延长，移植心脏中位生存时间大于100d。病理改变显著减轻，心肌细胞间淋巴细胞，单核细胞浸润明显减少，心肌细胞未见坏死。乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)、肌钙蛋白(Tn)以及脾脏OX40mRNA表达和OX40膜蛋白表达与空白对照组和阴性对照组相比明显下降。
结论：在DBA/2→Balb/C组合中(mHC不合)，单独阻断OX40/OX40L通路对小鼠移植心脏有保护作用，在C57/BL6J→Balb/C的组合中(MHC不合)，单独阻断OX40/OX40L通路未发现对移植心脏的保护作用。