背景：创面愈合是个复杂的、动态的生物学过程，包括炎症反应、细胞增殖、基质形成、创面收缩和重塑几个阶段，成纤维细胞在创面愈合中的作用最大。糖尿病溃疡是糖尿病患者的常见并发症之一，患者皮肤易受损伤，损伤后愈合困难。目前关于糖尿病创面难愈的机制仍未阐明，已有研究证实，在体外Wnt信号通路的持续激活后，人成纤维细胞增殖能力增强。Wnt信号通路的激活能促进糖尿病溃疡的创面愈合，Wnt信号通路能促进皮肤创面愈合。在糖尿病溃疡的体液环境中，同时存在高血糖和高游离脂肪酸（FFA）的危险因素，单纯高血糖的影响并不能完全还原糖尿病溃疡的发病机制。我们推测高脂也可能通过Wnt信号通路来引起人成纤维细胞增殖减少，从而影响创面愈合。因此，本研究旨在通过模拟2型糖尿病患者体内高血糖、高游离脂肪酸内环境，选择Wnt信号通路胞浆内关键因子β-连环蛋白（β-catenin），通过细胞实验，检测β-catenin蛋白的表达，间接反映Wnt信号通路与糖尿病溃疡发生发展的关系，在分子水平探讨糖尿病溃疡发病机制，为临床糖尿病溃疡预防以及治疗研究提供方向。目的：观察高浓度葡萄糖、高浓度游离脂肪酸对人皮肤成纤维细胞β-catenin表达的影响。方法：复苏正常成人皮肤成纤维细胞株，高糖DMEM（25mmol/L）培养基进行培养，使细胞生长同步化。首先，噻唑蓝法（MTT）筛选葡萄糖和游离脂肪酸对成纤维细胞最佳作用浓度：取对数期生长的细胞分为：葡萄糖处理组和游离脂肪酸处理组，葡萄糖处理组含不同浓度葡萄糖（25、30、35、40、50、60、70mmol/L），对照组不加葡萄糖；游离脂肪酸处理组含不同浓度软脂酸（100、200、400、600、800、1000μmol/L），对照组仅为高糖DMEM培养基。以1×104个/孔细胞接种于96孔板中，分别用含以上浓度的葡萄糖和软脂酸及体积分数10%FBS的培养液培养24h，以MTT法检测不同培养条件下成纤维细胞吸光度值，结合细胞形态学观察，选择一个对细胞会造成一定损伤，但又不会使细胞大量死亡的浓度作为处理成纤维细胞的最佳浓度。其次，以最佳浓度培养成纤维细胞不同时间，蛋白印记法检测胞浆内β-catenin蛋白的表达。取对数生长期的细胞分为3组：①高浓度葡萄糖组（35mmol/L），②高浓度游离脂肪酸组（200μmol/L），③高浓度葡萄糖糖+高浓度游离脂肪酸（35mmol/L+200μmol/L）联合组。于加入葡萄糖和软脂酸培养前（0h）以及培养后4、8、12、16、20、24、48h，收集各组细胞，采用Real time PCR和western blot法检测各组细胞β-catenin mRNA及蛋白的表达情况。结果：(1)培养24h后，成纤维细胞OD值于葡萄糖浓度35mmol/L和游离脂肪酸200μmol/L时分别为（0.7410.012；0.6760.043），与对照组（0.9340.007）相比开始下降（t值分别为1.70和2.48，P＜0.05），后随着葡萄糖和软脂酸浓度的增加，各组OD值逐渐减小（P＜0.05）。(2)35mmol/L葡萄糖组、200μmol/L游离脂肪酸组及二者联合培养组细胞内β-catenin mRNA及蛋白的表达分别于12h、4h和8h开始降低（t值分别为7.45，5.12,3.33，P<0.05），48h降至最低（P值均小于0.05）。结论：高葡萄糖、高游离脂肪酸都能抑制成纤维细胞β-catenin的表达，高游离脂肪酸抑制作用先于高葡萄糖。短时间内，高游离脂肪酸即表现出对β-catenin表达的抑制，而高葡萄糖的这种抑制作用不明显。当二者联合干预时，起初高葡萄糖能延缓高游离脂肪酸诱导的细胞β-catenin低表达，但在持续高糖存在的情况下，成纤维细胞β-catenin低表达程度比二者单独作用时更显著，高葡萄糖对高游离脂肪酸诱导的细胞β-catenin低表达呈现出先抑制后促进的作用。