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背景在子宫内膜异位症的发生和发展中,所牵涉的线粒体自我平衡机制并不明确。Mst1是癌症细胞在侵袭和远处转移、凋亡和增殖过程中重要的生长抑制因子。但是Mst1是否会通过调节线粒体功能来影响子宫内膜异位症中子宫内膜细胞的凋亡和迁移还不明确。目的本研究旨在探索Mst1基因在EM中病因学方面的作用和机制。尤其是与ESCs存活和迁移能力相关的Drp1相关线粒体分裂和Parkin介导的线粒体自噬的分子机制,以及验证p53信号通路的作用和Mst1基因的上游调控信号。以探究子宫内膜异位症的发病机制及可能的关键调控因子,为潜在的EM的临床靶向治疗提供理论基础,为临床治疗提供依据。方法1.使用Western Blot检验ESCs中目的产物的表达水平。2.使用MTT和TUNEL实验检测ESCs生存及凋亡的情况。3.通过含目的基因的腺病毒转染细胞进行目的基因过表达实验;通过目的基因特异性siRNA转染细胞进行目的基因敲除实验。4.线粒体功能评价实验:①Jc1染色监测线粒体膜电位变化(ΔΨm),ΔΨm的下降提示早期细胞凋亡;②流式细胞仪分析细胞中活性氧产物(ROS)浓度变化,ROS浓度升高提示细胞氧化应激状态;③测定线粒体膜通道孔(mPTP)开放,mPTP大量开放会将线粒体内促凋亡因子释放入细胞质,随后诱发细胞凋亡;④荧光免疫检测ESCs中促凋亡因子HtrA2/Omi活动;⑤WB和荧光免疫检测线粒体自噬。结果1.Mst1在子宫内膜异位症子宫内膜中的表达较正常内膜显著下调。2.Mst1过表达与ESCs无法迁移和种植密切相关。Drp1蛋白再分布激活线粒体分裂,通过HtrA2/Omi相关途径发动caspase 9相关的线粒体凋亡并抑制F-actin依赖性伪足形成。Parkin表达抑制引起的的异常线粒体自噬可以诱发能量代谢紊乱,导致细胞氧化应激及细胞浆钙离子超载。二者都可以诱发细胞凋亡并抑制ESCs迁移。3.在机制上,Mst1通过p53调控Drp1转录后修饰(磷酸化)促进Drp1蛋白在ESCs中的再分布以诱发线粒体分裂,同时,其也可以阻碍Parkin的转录以下调Parkin蛋白的表达水平以抑制线粒体自噬。4.NR4A/miR-181c是调节Mst1的上游信号。结论Mst1作为一个全新的子宫内膜异位症调控基因,其发挥的作用在ESCs中被验证,即Mst1促进ESCs的凋亡并抑制其迁移。在机制上,Mst1被上游信号NR4A/miR-181c激活,并通过其下游信号p53调控Drp1蛋白相关的线粒体分裂以及Parkin蛋白介导的线粒体自噬。未来可考虑将Mst1-Hippo-p53通路所涉及的关键作用因子作为治疗EM潜在靶点进行更深入及系统的研究,也许可针为临床子宫内膜异位症的治疗制定相关治疗策略。