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目的:通过网络药理学及体内外实验研究阳和汤治疗乳腺癌的疗效及作用机制。方法:1.应用TTD、Drugbank和Dis Ge NET数据库查找乳腺癌的重要靶点。应用STRING数据库构建乳腺癌靶点的蛋白-蛋白相互作用网络。2.通过TCMSP及TCMID数据库查找阳和汤中7味单药的有效成分,根据DL及OB值对其进行筛选;将筛选后的有效成分输入HIT及Chem Mapper数据库,查找这些成分所对应的靶点。3.将阳和汤的靶点和乳腺癌的靶点相匹配,并通过Cytoscape构建成分-靶点网络图,可预测阳和汤作用于乳腺癌的主要活性成分和靶点。将获得的靶点输入DAVID,可以获得涉及这些基因的KEGG信号通路,进而预测阳和汤治疗乳腺癌的主要作用机制。4.通过CCK-8及流式实验检测阳和汤对乳腺癌MDA-MB-231及MCF-7细胞株的体外增殖、周期及凋亡的影响。5.通过动物实验对阳和汤作用于乳腺癌的疗效及毒性进行体内验证,使用MCF-7细胞的肿瘤块移植方法,将裸鼠用于乳腺癌的移植瘤模型。测量每组小鼠移植瘤的大小及重量,以检测阳和汤对乳腺癌体内移植瘤的抑制作用;测量裸鼠的体重及脏器重量以检测阳和汤在体内的毒性作用;抽取裸鼠的血液行血常规及肝肾功能检测,以判断阳和汤在体内对血液系统及肝肾功能的影响。6.应用Western Blot实验对网络药理学中预测的靶点进行体外实验验证;通过对肿瘤组织的免疫组化检测,进一步验证阳和汤作用于乳腺癌的机制。7.抽取裸鼠的血液,应用ELISA实验技术评估实验动物血清中的激素水平,进一步验证网络药理学中对机制的预测。结果:1.经过上述数据库的查找,共找到123个乳腺癌的靶点;应用STRING数据库构建PPI网络,发现TP53,Akt1,EGFR,ESR1,ERBB2,VEGFA,PIK3CG,PIK3CA,Bcl-2在乳腺癌的发病中具有更重要的作用。2.应用TCMSP及TCMID数据库共找到362种阳和汤的有效成分,进一步通过HIT及Chem Mapper数据库查找其对应的靶点,共得到1457个有效靶点。3.将乳腺癌的靶点和阳和汤的作用靶点相匹配,得到38个共同靶点;将这些靶点同样构建PPI网络,发现Akt,EGFR,ESR1,PIK3CG,VEGFA,SRC,HSP90AA1可能是阳和汤治疗乳腺癌中更加重要的靶点;应用DAVID数据库,发现这些基因主要富集在以下与乳腺癌相关的信号通路中:PI3K/Akt信号通路,Ras信号通路,Erb B信号通路,MAPK信号通路,VEGF信号通路,p53信号通路,雌激素信号通路,Gn RH信号通路等,这些途径可能是阳和汤治疗乳腺癌的关键机制。4.体外实验表明,与对照组相比,阳和汤具有明显的抑制肿瘤细胞生长作用。流式实验结果表明,阳和汤处理后的乳腺癌细胞的凋亡显著增加,G0/G1期中细胞的百分比明显增加以及S和G2/M期中细胞的百分比显著减少,且MCF-7细胞组比MDA-MB-231细胞组效果更好。5.体内实验发现,阳和汤对裸鼠乳腺癌移植瘤的生长有明显的抑制作用,且没有明显的毒性作用。6.经过网络药理学分析发现,阳和汤的作用靶点主要集中在激素代谢和EGFR下游通路。所以我们应用Western Blot对EGFR,Erk,Akt,Caspase-3,Caspase-8,Bcl-2,Bax蛋白进行了实验验证,发现阳和汤治疗组EGFR,Erk,Akt,Bcl-2显著减低,Caspase-3,Caspase-8,Bax水平升高。应用免疫组化对Akt,Caspase-3,Bax进行验证也得出同样的结论。7.ELISA实验结果表明,阳和汤虽然没有降低雌激素水平,但是阳和汤组的E2/T,E2/PROG和E2/T+PROG的比率低于对照组。结论:阳和汤能够在体内外抑制乳腺癌的生长;阳和汤治疗乳腺癌具有较低的毒性反应;阳和汤治疗乳腺癌主要是通过调节激素水平及PI3K-AKT信号通路发挥作用。