建兰离体培养与种子萌发研究

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本研究以国兰品种之一建兰(Cymbidium ensifolium)为研究对象,对其授粉后不同时期蒴果、种胚的发育形态及种子萌发过程进行了显微观察及记录;并以建兰种子为材料,探究了种子授粉后不同天数、基本培养方式、光照以及植物生长物质等因素对种子萌发的影响;另外,本试验还探究了不同发育、切分大小的建兰根状茎在多种植物生长物质,如NAA、6-BA及TDZ处理下的分化情况,为提高建兰离体培养效率提供参考。本研究主要结果如下:1、对建兰蒴果、种胚的发育及种子萌发过程进行观察。结果表明,授粉后蒴果直径不断增加,果皮颜色变为深绿,唇瓣先于花瓣与萼片分别在授粉后5天、30内褐化凋谢,合蕊柱柱头向内弯曲花柱道关闭,颜色由浅黄色逐渐变为深绿;建兰子房由三心皮结构组成,在授粉前侧膜胎座已发育完成,胎座上有许多不规则指状突起,授粉后60天合子发育成早期球形胚,到第480天完全成熟,部分胚柄未发生退化;建兰种子存在萌发不一致性,从播种到形成幼苗至少需约30个月的时间,许多在培养两年后仍未萌发。建兰种子萌发过程分为未萌动、膨大、突破种皮、伸长、分支五个阶段,种子膨大后发育至各阶段的时间约为1-3个月。2、种子授粉后不同天数、基本培养方式、光照以及植物生长物质对建兰种子萌发均具有显著的影响。具体研究表明:授粉后60天建兰种子未萌发,而授粉360、480天种子萌发数量低于授粉后90天至270天种子;1/2MS培养基中建兰种子的萌发效果优于MS和1/4MS培养基;种子在液体培养基上萌发率显著高于固体培养基可达39.56%;光照对建兰种子的萌发不是必需的,授粉后360天的建兰种子在1/2MS+25g/L蔗糖+2mg/L 6-BA中暗培养萌发率可达96.27%;而在NAA和6-BA对种子萌发影响的研究则发现,两者均可显著提高建兰种子萌发率,但6-BA更有利于种子萌发后的生长发育;另外对乙烯的研究则表明,低浓度乙烯(1μl/L和5μl/L)会抑制建兰种子萌发,10μl/L和20μl/L的乙烯气体注射浓度则使建兰种子的萌发率与不添加乙烯的对照组类似。3、建兰不同发育、切分大小的根状茎分化效率有显著差异。对于不同发育大小根状茎而言,在1/2MS+25g/L蔗糖+2.0mg/L 6-BA+0.2mg/L NAA的培养基上,中型和大型根状茎生芽率较高,分别为492%和488%,而大型根状茎生根率较小,中型更高为260%;而使用切分根状茎进行组织培养时,大型切分根状茎于1/2MS+25g/L蔗糖+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA培养基上可最为有效的促进生芽和生根,分化率分别可达1107%和227%。
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