大麻素WIN55,212-2对体外培养牛眼小梁细胞MMP-3,MMP-9及TIMP-1表达的影响

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目的:研究大麻素WIN55,212-2对体外培养的牛眼小梁细胞MMP-3、MMP-9及TIMP-1表达的影响,从而探讨其降眼压的机制。方法:1.牛眼小梁细胞的培养和鉴定:应用组织块培养法对牛眼小梁细胞进行原代培养,传代培养,采用免疫组织化学方法对第3代细胞(波形蛋白,NSE,VIII因子相关抗原染色)进行鉴定,应用透射电镜对细胞进行生长特性及形态学的观察,确定所得细胞大部分为小梁细胞组织来源;2.免疫组化SP染色法测定MMP-3,MMP-9的量:将经过消化离心后的传3代的小梁细胞接种于孔底铺有盖玻片的6孔培养板(密度:5×104个/mL),当细胞铺满大部分孔底时,改换培养液(不含FBS)进行饥饿培养(48h),后随机分为6个组(1孔/组)。1~5组施加含终浓度0(对照组)、1、10、20、40μmol/L大麻素WIN55,212-2的无血清培养液,第6组为阴性对照组(以PBS液为一抗)。继续培养48h后对各组细胞爬片进行免疫细胞化学染色(MMP-3及MMP-9),重复该实验共4次。结果进行计算机图像分析并进行统计学检验。3.提取细胞上清液用ELASA法检测随浓度的不同TIMP-1量的变化:将经消化离心后的传3代小梁细胞接种于96孔板(密度:5×104个/mL),当细胞铺满大部分孔底时,改换培养液(不含FBS)进行饥饿培养(48h),以使所有细胞同步。随后将其随机分为5组(15孔/组),施加含终浓度0(对照组)、1、10、20、40μmol/L大麻素WIN55,212-2的无血清培养液,继续培养48h。后分组吸出各孔上清液置于EP管中,-20℃冰箱保存,应用ELASA法检测随浓度的不同TIMP-1量的变化情况。结果:体外培养的牛眼小梁细胞表达MMP-3及MMP-9;含大麻素WIN55,212-2终浓度为1、10、20、40μmol/L的无血清培养液可促进牛眼小梁细胞MMP-3及MMP-9的表达,且与浓度的呈正相关性,并抑制TIMP-1的表达,与浓度呈负相关性。结论:一定剂量的大麻素可以促进牛眼小梁细胞MMP-3及MMP-9的表达(P<0.05),并抑制TIMP-1的表达(P<0.01),从而达到降低眼压的目的。
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