可口革囊星虫多糖对小鼠免疫调节作用的研究

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可口革囊星虫(Phasolosma esculenta),俗称海丁、沙虫、海蚂蝗等,为我国土著种,主要分布东海和南海,营底栖穴居生活。我国多部药典纪录了星虫的食用及药用价值,甚至有些地区用其替代中药冬虫夏草。星虫具有滋阴、补肾等功能,常服用可提高机体抵抗力。以它为原料做的“土笋冻”也是我国沿海人民所喜爱的食品之一。目前关于可口革囊星虫已经初具规模,但是其开发利用程度较低,仅作为滋补食品食用,对其潜在的药用价值尚未进行开发。多糖是由多个单糖分子脱水结合而成,广泛存在于自然界中,是重要的生命活性物质。多糖广泛参与物质运输、免疫调节和细胞识别等机体活动。本论文以可口革囊星虫星虫多糖(Phasolosma esculenta polysaccharide,PEP)为研究对象,通过活性多糖提取工艺的优化和对其组分进行抗败血症的功能实验评价,探讨可口革囊星虫活性多糖对小鼠的免疫调节功能。对可口革囊星虫抗氧化性多糖提取工艺进行研究。在单因素的基础上,以单因素条件下的DPPH·清除率为考察指标,确定提取时间、加酶量、提取温度的最佳范围。通过响应面优化分析,优化并得到最佳提取条件。结果表明:可口革囊星虫多糖的最佳提取工艺条件为提取温度65℃,提取时间7h,加酶量10000U/g。在此条件下,星虫粗多糖的得率为0.879±0.001%,DPPH·清除率为72.5%。在此优化条件下得到的活性PEP,并对其进行组分解析和结构鉴定。可口革囊星虫的酶解液,经TCA(三氯乙酸)法脱蛋白,通过无水乙醇醇沉得到可口革囊星虫粗多糖,无水乙醇和丙酮反复洗涤,真空冷冻干燥得可口革囊星虫多糖(PEP)。对PEP通过红外光谱进行结构分析,采用高效液相色谱(HPLC)进行PEP的单糖组分分析。结果表明,PEP含葡萄糖和半乳糖,还有少量甘露糖和阿拉伯糖,具有典型的多糖结构,且单糖之间以α和β糖苷键相连。本论文构建了败血症小鼠模型,并对PEP对小鼠的免疫调节功能进行初步评价。实验采用4个组别,空白对照组(生理盐水,SA)、PEP低剂量组(1μg/(g·d),PS1)、PEP中剂量组(10μg/(g·d),PS2)、PEP高剂量组(50μg/(g·d),PS3)。4组小鼠相同处理,探究PEP对败血症型小鼠的存活率、载菌量、血浆细胞因子的影响。实验结果表明PEP可以增加败血症小鼠的的存活率,中剂量多糖注射组存活率最高;其中载菌量实验表明,PEP有抑菌功能;通过ELISA法检测败血症小鼠血浆中细胞因子含量发现,PEP可以促进抗炎症性因子IL-10的分泌,抑制IL-1β和TNFα的分泌量。IL-10、IL-4、IL-13等属于促炎因子,参与全身炎症反应综合症(Systemic inflammatory response syndrome,SIRS)。IL-1β、TNFα、IL-6、IL-12等属于抗炎介质,参与代偿性抗炎反应综合症(Compensatoryanti-inflammatory response syndrome,CARS)。
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