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目的：本研究采用高迁移率族蛋白 B1(HMGB1)刺激小鼠树突状细胞(DC)，探究DC中Sestrin2(SESN2)表达及定位改变与内质网应激、细胞凋亡的内在关系，并进一步分析SESN2在HMGB1诱导DC细胞凋亡中的潜在作用和内质网应激(ERS)相关性凋亡信号转导机制。 方法：实验一：将培养的小鼠树突细胞DC2.4分为正常对照组及HMGB1 8、24、48h组(n=4)，HMGB1组加入10ng/ml HMGB1培养相应时间；另将DC2.4细胞分为正常对照组及1、10、100 ng/ml HMGB1组(n=4)，给予不同浓度HMGB1刺激48h。采用Western blot技术检测各组细胞SESN2表达；应用共聚焦激光显微镜检测SESN2在细胞中表达及定位；采用流式细胞术检测各组细胞凋亡情况；通过Western blot技术分析各组细胞cleaved-caspase-3、Bcl-2、Bax、GRP78、ATF4蛋白表达水平。实验二：将载有过表达空载体(NC)、沉默空载体(NS)、过表达病毒载体SESN2 LV-RNA及沉默病毒载体SESN2 siRNA转入DC2.4细胞中(n=4)，建立SESN2过表达以及沉默的细胞模型，给予100ng/ml HMGB1刺激48h。采用共聚焦激光显微镜观察SESN2在细胞中与内质网的定位关系及内质网形态改变；通过细胞计数法(CCK8 法)、流式细胞术、Hoschest 33342 染色法检测各组细胞活性与凋亡情况；采用Western blot技术分析各组细胞凋亡相关蛋白及ERS相关蛋白的变化。 结果：1. HMGB1刺激DC可明显诱导SESN2表达，DC凋亡活性增加且伴有ERS水平加剧。与正常对照组比较，10ng/ml HMGB1刺激24、48h以及1、10、100ng/ml HMGB1刺激48h后，DC2.4细胞中SESN2表达水平均显著增强，差异有统计学意义(P＜0.05)；10、100ng/ml HMGB1刺激48h后，DC2.4细胞的凋亡率(分别为 14.71%±2.39%、17.48%±4.04%)明显高于正常对照组(7.35%±1.33%，P＜0.05或P＜0.01)，而1ng/ml HMGB1刺激48h后DC2.4细胞凋亡率与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。此外，10 ng/ml HMGB1刺激DC2.4细胞24、48 h后，ERS相关蛋白表达水平显著上调，较正常组差异有统计学意义(P＜0.05)。 2. 100 ng/ml HMGB1处理后，DC中SESN2表达增加，内质网形态发生明显改变，SESN2蛋白与内质网存在一定的共定位，且SESN2主要表达于细胞质中。转染SESN2 siRNA沉默SESN2基因表达后，HMGB1诱导的内质网形态碎裂、肿胀加剧；而转染SESN2LV-RNA上调SESN2表达则明显可缓解HMGB1对内质网形态的损伤。 3. SESN2 LV-RNA慢病毒转染DC2.4细胞可显著增加SESN2表达水平，缓解HMGB1诱导的细胞凋亡。给予100 ng/ml HMGB1刺激48h后，SESN2 LV-RNA 组较空载体组凋亡率显著下降[(35.57%±1.69%) vs. (49.04%±4.87%)， P＜0.05]，cleaved-caspase-3 活化明显减弱(P＜0.05)，cleaved-caspase-9/caspase-9比值降低(P<0.05)，Bax/Bcl-2 比值下降(P＞0.05)，cleaved-caspase-12/caspase-12活化水平有所升高，CHOP表达水平下调。同时，100 ng/ml HMGB1刺激48h， SESN2 LV-RNA组较空载体组ERS相关蛋白GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、uXBP-1表达不同程度地减少，内质网应激水平显著缓解。 4. SESN2 siRNA慢病毒转染DC2.4，与空载体组比较SESN2表达水平下降56.9%，且加剧HMGB1诱导的DC细胞凋亡。在100 ng/mlHMGB1刺激后， SESN2 siRNA组SESN2表达水平显著下降，与空载体组及正常对照组比较，差异均有统计学意义(P＜0.05)。予100 ng/ml HMGB1处理DC2.4细胞，发现SESN2 siRNA 组较空载体组凋亡率明显增多[(65.96%±2.50%) vs. (50.01%±2.07%) ， P＜0.05]；与空载体比较，cleaved-caspase-3表达水平明显上升、cleaved-caspase-9/caspase-9 比值活化增加、Bax/Bcl-2 比值升高、cleaved-caspase-12/caspase-12 活性增强、CHOP表达水平上调，差异均有统计学意义(P＜0.05)。此外，给予100 ng/ml HMGB1刺激48h，SESN2 siRNA组与空载体组比较，ERS相关蛋白GRP78、p-PERK、p-eIF2α、ATF4、uXBP-1的表达水平均明显增加，提示下调SESN2表达能加剧内质网应激水平。 结论：1. 一定浓度HMGB1可诱导SESN2在DC中表达上调、诱导DC细胞凋亡增加且伴有内质网应激发生；2. 上调SESN2表达可有效降低HMGB1诱导的DC2.4 细胞凋亡，主要通过抑制 PERK 通路活化，缓解内质网应激水平，降低CHOP、cleaved-caspase-12表达进而减少ER相关性凋亡，并改善HMGB1刺激下内质网形态异常改变；3. SESN2基因沉默后HMGB1介导的DC细胞凋亡增多、细胞活性降低，HMGB1作用下内质网形态改变加剧，其诱发的内质网应激相关信号途径明显被激活。