水稻白叶枯病菌PXO99A中PhaR基因功能的初步研究

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水稻白叶枯病菌Xanthomonas oryzae pv. oryzae (Xoo)引起水稻上重要的细菌病害。在对水稻白叶枯病菌PXO99A的研究中发现存在有PhaR基因,该基因可以编码一种PHAs(聚羟基脂肪酸酯)颗粒相关的蛋白。PHAs (聚羟基脂肪酸酯)是一种细胞内碳和能量的储藏物质,多种微生物在一定条件下能在胞内积累PHAs作为碳源和能源的贮存物,PHAs比糖原、多聚磷酸或脂肪更加普遍地存在于微生物中。本研究采用基因敲除的方法构建PhaR基因的缺失突变体,通过缺失突变体和野生型菌的性状对比,来进一步研究该基因的功能。首先通过重叠延伸PCR的方法来构建用于PhaR缺失突变的重组体pMDPhaRF1F2,将其导入PXO99A后,筛选抗卡那霉素的PXO99转化子。利用PCR验证法筛选发生双交换的缺失突变体PXO△PhaR.经缺失突变体与野生型菌株性状比较发现,缺失突变体PXO△PhaR的菌落形态与野生型菌有着较明显的差异、游动性减弱,菌体生长缓慢,并且产生EPS的能力减弱;而在产淀粉酶和耐H2O2胁迫方面,则与野生型菌株无差异。烟草过敏反应和水稻致病性测定发现,缺失突变体PXO△PhaR在烟草上激发HR反应,但对水稻的致病性减弱。由此可见,PhaR基因影响着黄单胞菌菌落形态等一系列性状,并且影响黄单胞菌的致病性。从表型上可以发现,缺失突变体在产生胞外多糖方面与野生型菌有着十分明显的差异,而胞外多糖也是很重要的一个致病因子。对于PhaR基因在黄单胞菌对水稻的致病性中是如何起作用的,还有待进一步研究。
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