论文部分内容阅读
马立克氏病(MD)是鸡的一种淋巴组织增生性疾病，对家禽业危害极大。开展广西三黄鸡抗MD相关基因筛选的研究，旨在确立相应的分子遗传学标记来促进三黄鸡的抗MD育种工作，以弥补传统的疫苗接种为主的MD防制手段的不足。至此，已完成如下工作： 应用广西MDV-1强毒分离株YL040920／C6对7日龄46羽普通霞烟鸡(分两组：A组未免疫，24羽、B组1日龄免疫HVT，22羽)和53羽MD抗性鸡(分两组：C组未免疫，27羽、D组1日龄免疫HVT，26羽)分别进行攻毒试验，按常规分开隔离饲养，观察和记录鸡的死亡情况，至攻毒后(PC)12周结束试验。结果发现，A、B、C、D四组的肿瘤死亡率分别为66.67％、63.63％、44.44％和42.31％，肿瘤发生率分别为75.00％、72.72％、48.14％和46.15％，经t检验表明，MD抗性鸡的肿瘤死亡率显著低于普通霞烟鸡(P＜0.05)，肿瘤发生率极显著低于普通霞烟鸡(P＜0.01)；免疫鸡与未免疫鸡之间的死亡率及肿瘤发生率差异不大(P＞0.05)；对不同脏器肿瘤发生率的统计表明，心脏肿瘤发生率最高(43.5％)，肝脏肿瘤次之(29％)，皮肤肿瘤再次之(10.6％)；采用血凝抑制(HI)试验测定试验鸡血清鸡新城疫(ND)和禽流感(AI)抗体的效价，结果表明经过多次ND和AI疫苗免疫后，鸡体ND和AI抗体滴度一直没能达到预期水平，表明MDV感染霞烟鸡后产生了一定的免疫抑制作用。攻毒前后共计五次无菌采集并分离鸡外周血淋巴白细胞(PBLs)，置于—80℃保存，为下一步研究准备材料。 利用聚合酶链式反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)分析的方法，对MDV攻毒后抗性存在差异的112份霞烟鸡PBLs生长激素基因第四内含子(GH1)的PCR扩增产物，采用限制性内切酶Sac Ⅰ和Msp Ⅰ分别进行限制性片段长度多态性检测。结果发现仅有1个Sac Ⅰ酶切位点存在于GH1上，不具备多态性，而在GH1上存在2个Msp Ⅰ酶切位点，形成6种基因型分别为：AA、AB、AC、BB、BC和CC。MD抗性鸡中AA型所占比例最高(50％)，BB、CC型为(0％)，在普通霞烟鸡中BB、CC型分别为(9.26％和1.85％)。经过卡方独立性检验表明，6种基因型在MD抗性鸡和普通霞烟鸡中的分布差异并不显著(P＜0.05)。MD抗性鸡基因纯合