【摘 要】
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目的:采用中药黄芩苷(baicalin)改变体外培养的小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell-D3)mES-D3微环境,探讨黄芩苷对mES-D3定向分化为心肌样细胞的影响。方法:在无白血病抑制
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目的:采用中药黄芩苷(baicalin)改变体外培养的小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cell-D3)mES-D3微环境,探讨黄芩苷对mES-D3定向分化为心肌样细胞的影响。方法:在无白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)存在的条件下,96孔板中体外培养mES-D3细胞8天,MTT法检测不同浓度的黄芩苷对ES细胞增殖和活性的影响,筛选合适的浓度用于分化诱导。采用经典的“悬滴-悬浮-贴壁”三步法,用三种浓度的黄芩苷诱导ES细胞向心肌样细胞分化,倒置显微镜下观察细胞形态;在不同贴壁时间点计数跳动的EB(embryoid body )个数,计算跳动EB的百分率;免疫细胞化学方法检测心肌肌小节特异性α-辅肌动蛋白(α-actinin)的表达;RT-PCR检测心肌特异性α-肌球蛋白重链(α-MHC)的表达;用流式细胞技术检测心肌细胞分化比例。结果: MTT结果显示,1μmol/L,10μmol/L,102μmol/L,103μmol/L的黄芩苷显著抑制了mES-D3细胞的增殖,在所选浓度中10-1μmo/L的黄芩苷对细胞增殖的影响最小。通过对分化EB形态的观察,我们发现中药诱导组EB个数较空白组少,EB大小较空白组小,但是流式细胞技术结果显示1μmo/L黄芩苷组明显提高了心肌样细胞分化率。而且免疫细胞化学和RT-PCR分别检测到α-actinin和α-MHC的表达。结论:高浓度的黄芩苷显著了抑制mES-D3细胞的增殖,1μmol/L的黄芩苷可提高mES-D3细胞向心肌样细胞的分化率,其诱导分化率高达21.45 %。
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